基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术的龙血竭成分定性定量分析

摘要

基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-QE-Orbitrap-MS)技术鉴定龙血竭中的化学成分，并建立同时测定龙血竭中主要成分含量的分析方法。采用色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(1.7μm, 2.1×100 mm),含0.1%甲酸的乙腈-水为流动相，高能电喷雾离子源(HESI),负离子模式扫描。结合各化合物的精确分子质量、二级质谱碎片信息和文献报道数据及对照品比对，鉴定龙血竭中的化学成分。建立基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术同时测定龙血竭中龙血素A、龙血素B、龙血素C、龙血素D、白藜芦醇和7,4′-二羟基黄酮质量分数的分析方法。定量分析方法以0.1%甲酸水(A)与0.1%甲酸乙腈(B)为流动相。梯度洗脱程序：0～2 min, 22%～45%B; 2～6 min, 45%B; 6～7 min, 45%～95%B; 7～8 min, 95%～22%B; 8～11 min, 22%B。流速为0.25 mL/min;柱温为35℃;进样量为5μL。HESI源，负离子模式下平行反应监测(parallel reaction monitoring, PRM)扫描，毛细管温度为350℃,喷雾电压为2.8 kV,S-透镜水平为35 kV,鞘气流速为35 arb,辅助气流速为10 arb。结果表明，在龙血竭药材中，鉴定出25个化合物，其中黄酮类化合物22个，二苯乙烯类化合物3个，共9个化合物经与对照品比对而准确鉴定。选择龙血素A、龙血素B、龙血素C、龙血素D、白藜芦醇和7,4′-二羟基黄酮为质量分数测定的指标成分，6个成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 2),精密度、重复性、稳定性均符合相关要求，加样回收率为92.2%～105.0%。对14批龙血竭药材进行质量分数测定，方法可行。龙血素B在龙血竭中的质量分数为0.41%～7.25%,是6个指标成分中质量分数最高的化学物质。综上，本研究在龙血竭化学成分系统分析的基础上，建立6种主要成分的质量分数测定方法，为龙血竭的药效物质基础与质量控制提供参考。

关键词

龙血竭 / 超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-QE-Orbitrap-MS) / 质量控制 / 黄酮类成分 / 龙血素B