EZH2通过调控RUNX1影响骨髓增生异常综合征免疫逃逸与免疫细胞活性

摘要

目的 探讨zeste基因同源物增强子2(EZH2)通过调控RUNX家族转录因子1(RUNX1)对骨髓增生异常综合征(MDS)免疫逃逸和免疫细胞活性的影响。方法 收集2024年8月～2025年2月山西医科大学第二医院15例MDS新鲜骨髓标本作为实验(MDS)组，同时纳入10例健康人新鲜骨髓标本作为对照(Con)组。定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组骨髓标本中EZH2和RUNX1的表达水平。采用随机数字表法将120只JUN小鼠分为模型(Model)组60只、EZH2基因敲低(KDEZH2)组60只，同时以60只复杂遗传性CC小鼠作为对照(Con)组。蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组小鼠骨髓标本中EZH2和RUNX1的表达水平；CCK-8法检测各组小鼠骨髓标本中MDS原始细胞增殖活性；免疫细胞占淋巴细胞百分比方法比较各组小鼠T细胞亚群、B细胞和NK细胞的差异；流式细胞术比较各组T细胞亚群、MDS原始髓细胞和调节性T细胞(Treg)中程序性死亡受体1(PD-1)及其配体(PD-L1)的表达情况；细胞微球芯片技术(CBA)检测外周血清1型辅助性T细胞(Th1细胞)/2型辅助性T细胞(Th2细胞)/17型辅助性T细胞(Th17细胞)/转化生长因子-β(TGF-β)细胞因子水平。结果 qRT-PCR检测结果显示，与Con组人骨髓标本比较，MDS组人骨髓标本EZH2表达水平升高，RUNX1表达水平降低(均P<0.05)。Western blot检测结果显示，与Con组小鼠骨髓标本比较，Model组小鼠骨髓标本EZH2表达水平升高，RUNX1表达水平降低(均P<0.05);与Model组小鼠骨髓标本比较，KDEZH2组骨髓标本EZH2表达水平降低，RUNX1表达水平升高(均P<0.05)。CCK-8法检测结果显示，与Con组小鼠比较，Model组小鼠骨髓中MDS原始细胞增殖活性增强(P<0.05),与Model组小鼠比较，KDEZH2组小鼠骨髓中MDS原始细胞增殖活性减弱(P<0.05);免疫细胞占淋巴细胞百分比方法检测结果显示，与Con组小鼠比较，Model组小鼠T细胞亚群、B细胞和NK细胞计数明显减少(均P<0.05),与Model组小鼠比较，KDEZH2组小鼠T细胞亚群、B细胞和NK细胞计数明显升高(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示，与Con组小鼠比较，Model组小鼠T细胞亚群、MDS原始细胞和Treg细胞PD-1/PD-L1的表达升高(均P<0.05),与Model组小鼠比较，KDEZH2组小鼠细胞亚群、MDS原始细胞和Treg细胞PD-1/PD-L1的表达降低(均P<0.05)。外周血清细胞因子检测结果显示，与Con组小鼠比较，Model组小鼠Th1、Th17细胞因子水平显著降低而Th2和TGF-β分泌显著升高(均P<0.05),与Model组小鼠比较，EZH2 KD组Th1、Th17细胞因子水平显著升高而Th2和TGF-β分泌显著降低(均P<0.05)。结论EZH2可能通过抑制RUNX1表达调控肿瘤细胞处于免疫抑制的微环境，促进肿瘤细胞免疫逃逸，有利于MDS的进展。

关键词

zeste同源物增强子2 / RUNX家族转录因子1 / 骨髓增生异常综合征 / 免疫逃逸 / 免疫细胞活性

基金资助

吴阶平医学基金资助项目(No.320.6750.2024-11-26)