口腔牙龈卟啉单胞菌通过TLR4/NF-κB信号通路对小鼠PND发生的影响

摘要

目的 探讨口腔牙龈卟啉单胞菌(Pg)能否通过调控TLR4/NF-κB信号通路影响围手术期认知功能障碍(PND)的发生。方法 细胞实验取对数生长期的BV-2细胞随机分为两组：对照组(C组)、LPS-Pg处理组(P组),采用Western blot实验检测细胞中信号蛋白(TLR4、NF-κB p65、NLRP3、TNF-α)的表达，通过免疫荧光实验检测NF-κB p65在细胞核内外的表达变化。动物实验将C57BL/6小鼠随机分为6组：对照组(C组)、手术组(S组)、Pg感染组(P组)、Pg感染+手术组(PS组)、TLR4抑制剂组(T组)、Pg感染+手术+TLR4抑制剂组(PST组),对各组进行相应的处理后，应用水迷宫测试观察Pg感染对小鼠术后认知行为的影响，应用组织免疫化学实验观察Pg感染对小鼠海马组织中小胶质细胞活化的影响。结果 细胞实验结果显示，与C组比较，Western blot检测发现P组的TLR4、NLRP3、TNF-α表达量明显增高(均P<0.05),NF-κB在核内的表达量增加(P<0.05)、核外表达量减少(P<0.05),免疫荧光实验显示P组NF-κB表达量增多且向核内转移。动物实验结果显示，水迷宫实验结果显示，各组小鼠在术前训练阶段的表现并无显著差异，其逃避潜伏期与平均游泳速度均处于相近水平(均P>0.05)。术后测试阶段的结果显示，相较于C组，S组和PS组小鼠在目标象限的停留时间更短，穿越平台的次数也较少(均P<0.05)。与PS组比较，PST组小鼠在目标象限的停留时间较长，且穿越平台的次数也较多(均P<0.05)。对海马组织进行免疫组化分析提示PS组中的阳性细胞数量显著多于C组和PST组，这些阳性细胞的胞体增大，突起变短，且小胶质细胞呈现激活状态。结论 Pg感染诱发小鼠围手术期中枢神经系统炎症反应增强，引起小鼠PND的发生，可能与激活TLR4/NF-κB信号通路有关。

关键词

围手术期认知功能障碍 / 牙龈卟啉单胞菌 / 神经炎症 / TLR4 / NF-κB

基金资助

河南省医学科技攻关计划项目（No.LHGJ20220690）; 河南省高等学校重点科研项目（No.22A320032）