基于NLRP3炎症小体探讨龙葵素膏治疗膝关节创伤性滑膜炎的机制及安全性

摘要

目的 评价龙葵素膏皮肤用药的安全性，并探讨龙葵素膏治疗膝关节创伤性滑膜炎模型兔的作用机制。方法将16只新西兰大白兔分为完整皮肤单次给药组、完整皮肤多次给药组、破损皮肤单次给药组、破损皮肤多次给药组，每组4只，通过脊柱两侧皮肤对照观察龙葵素膏的皮肤刺激性。将18只豚鼠分为空白组、龙葵素膏组、阳性药物组，每组6只，分别给予赋形剂、龙葵素膏和2,4-二硝基氯代苯，观察龙葵素膏的皮肤过敏性。然后选取30只新西兰大白兔，随机分为空白组、模型组、龙葵素膏低剂量组、龙葵素膏高剂量组和扶他林组，每组6只。除空白组外，均建立创伤性滑膜炎模型。外敷用药干预后观察各组兔膝关节周径和皮温变化；用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组兔膝关节滑膜组织病理形态变化。用彩超观察膝关节关节积液和异常血流信号。采用ELISA法测定膝关节关节液中白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)的含量。Western blot法检测膝关节滑膜组织中NLRP3、pro-Caspase-1和cleaved-Caspase-1蛋白表达。结果 皮肤刺激性试验结果显示完整皮肤单次给予龙葵素无刺激性，完整皮肤多次给予龙葵素观察的第1天有轻度刺激性，第3天消退；破损皮肤单次和多次给予龙葵素膏均存在中度刺激性。皮肤过敏性试验结果显示龙葵素膏组与空白组豚鼠均未出现过敏反应。与空白组相比，模型组兔膝关节周径和皮温明显升高(均P<0.01);滑膜增厚明显，有大量积液存在；滑膜细胞出现以浆细胞和淋巴细胞为主的炎性浸润，组织排列紊乱；膝关节关节液中IL-1β和IL-18的含量显著升高(均P<0.01);膝关节滑膜组织中NLRP3、pro-Caspase-1和cleaved-Caspase-1蛋白表达显著升高(均P<0.01)。与模型组比较，各药物治疗组兔膝关节周径和皮温均显著降低(均P<0.01);滑膜厚度、积液情况和滑膜炎性浸润均明显改善；膝关节关节液中IL-1β和IL-18的含量显著降低(均P<0.05);膝关节滑膜组织中NLRP3、pro-Caspase-1和cleaved-Caspase-1蛋白表达除龙葵素膏低剂量组无显著差异外(均P>0.05),龙葵素膏高剂量组和扶他林组均显著降低(均P<0.05)。结论 龙葵素膏对完整皮肤存在轻度刺激性，对破损皮肤存在中度刺激性，龙葵素膏不适宜用于破损皮肤处，龙葵素膏对皮肤无致敏性。龙葵素膏能缓解膝关节创伤性滑膜炎的进展，其机制可能与调控NLRP3炎症小体有关。

关键词

皮肤刺激性试验 / 皮肤过敏性试验 / 膝关节创伤性滑膜炎 / α-茄碱 / NLRP3炎症小体