miR-153-3p通过调控Nrf2/System Xc^-分子轴抑制低氧诱导的滋养细胞铁死亡

摘要

目的 探讨下调miR-153-3p对低氧诱导下滋养细胞铁死亡的影响及作用机制。方法 采用qRT-PCR检测子痫前期（PE）患者和正常孕妇胎盘组织中miR-153-3p及铁死亡相关基因mRNA表达水平。以人绒毛膜滋养层细胞株HTR-8/SVneo作为研究对象，将miR-153-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor-NC与si-核因子E2相关因子2（Nrf2）及其阴性对照si-NC分别转染至HTR-8/SVneo细胞中，并在常氧（Nor）或低氧（Hyp）条件下培养48 h, CCK-8检测细胞增殖活性；qRT-PCR检测细胞中miR-153-3p及Nrf2 mRNA表达水平；DCFH-DA探针法检测细胞中活性氧（ROS）水平；比色法检测细胞中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）活性水平；亚铁离子检测试剂盒检测细胞中Fe²⁺水平；试剂盒法检测细胞中胱氨酸（Cys）及细胞上清液中谷氨酸（Glu）水平；Western blot检测细胞中Nrf2/System Xc^-分子轴相关蛋白Nrf2、GPX4、SLC7A11表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-153-3p与Nrf2之间的靶向调控关系。结果 与正常孕妇比较，PE患者胎盘组织中miR-153-3p及铁死亡激活基因COX2、ACSL4、NOX1等mRNA表达升高，而铁死亡抑制基因GPX4、SLC7A11、SLC3A2、FTH1等mRNA表达降低（均P<0.05）。随着低氧诱导的时间延长，HTR-8/SVneo细胞增殖活性逐渐降低，细胞中miR-153-3p表达水平以及ROS、MDA和Fe²⁺水平升高（均P<0.05）,而SOD、GSH和Cys水平以及上清液中Glu水平降低（均P<0.05）,同时细胞中铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11表达降低（均P<0.05）。下调miR-153-3p可降低低氧诱导下HTR-8/SVneo细胞中的ROS、MDA和Fe²⁺水平（均P<0.05）,促进细胞中SOD和GSH活性水平升高，上调细胞中Cys水平和细胞上清液中Glu水平，同时促进铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11表达（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实Nrf2是miR-153-3p的下游靶基因，而沉默Nrf2可逆转下调miR-153-3p对低氧诱导下HTR-8/SVneo细胞铁死亡的抑制作用。结论 下调miR-153-3p可抑制低氧诱导下的人滋养细胞HTR-8/SVneo铁死亡，其机制可能与靶向Nrf2调控Nrf2/System Xc^-分子轴有关。

关键词

滋养细胞 / 低氧 / miR-153-3p / 铁死亡 / Nrf2/System Xc^-轴