C1q样蛋白4对乳腺癌侵袭及转移影响的体内研究

摘要

目的 通过体内实验验证C1q样蛋白4(C1ql4)对NOD/SCID鼠乳腺癌转移瘤组织上皮间质转化(EMT)和干性特征的影响。方法 构建免疫荧光素标记的稳转低表达和过表达C1ql4的细胞系(MDA-MB-231、MCF-7),尾静脉注射到4周龄雌性NOD/SCID鼠体内，IVIS活体成像检测转移瘤形成情况。注射8周后安乐死小鼠，取肺组织固定后石蜡包埋，苏木精-伊红(HE)染色观察转移灶数量；免疫组织化学染色(IHC)方法检测肺组织标本CD44、SOX2蛋白及ER、Her-2蛋白的表达水平；提取新鲜肺转移瘤中的总RNA和蛋白，qRT-PCR和Western blot法检测EMT和干细胞特性相关蛋白表达。结果 IVIS活体成像结果显示：与MDA-MB-231组相比，MDA-MB-231-sh组小鼠体内肿瘤的荧光值及荧光密度显著降低(P<0.05);与MCF-7组相比，MCF-7-OE组小鼠体内肿瘤的荧光值及荧光密度显著升高(P<0.05)。小鼠肺内转移瘤组织HE染色及IHC结果显示：与MDA-MB-231组相比，MDA-MB-231-sh组小鼠肺内转移灶数量明显减少，且CD44、SOX2表达下调(均P<0.05),而ER及Her-2表达无明显变化；与MCF-7组相比，MCF-7-OE组小鼠肺内转移灶数量明显增多且CD44、SOX2表达增加(均P<0.05),ER及Her-2表达无明显变化。小鼠肺内转移瘤组织qRT-PCR和Western blot结果显示，MDA-MB-231-sh组干性相关蛋白和间质标志物表达量明显低于MDA-MB-231组(均P<0.05),但上皮标志物表达量则高于MDA-MB-231组(P<0.05);MCF-7-OE组干性相关蛋白和间质标志物表达量明显高于MCF-7组(均P<0.05),但上皮标志物表达量则低于MCF-7组(P<0.05)。结论 C1ql4通过增强癌细胞干性表达和EMT进程促进小鼠乳腺癌肺转移瘤的形成和进展。

关键词

乳腺癌 / C1q样蛋白4 / 上皮间质转化 / 干细胞特性