TRiC/CCT复合体对mTORC1完整性及其活性的调控作用研究

摘要

目的 探讨TRiC/CCT复合体(TCP-1 ring complex/chaperonin containing TCP-1)与mTOR复合体1(mTORC1)之间可能的相互调控机制。方法 采用免疫共沉淀技术和Western blot技术探究TRiC/CCT复合体与mTORC1之间的相互作用；使用雷帕霉素抑制mTORC1活性后，制备可溶性及不溶性细胞蛋白样本，比较受CCT辅助折叠的蛋白表达水平变化；通过非变性凝胶电泳技术观察TRiC/CCT复合体的变化，探究mTORC1对TRiC/CCT复合体完整性的影响；利用慢病毒介导的shRNA静默HEK-293T细胞中的CCT2或CCT5基因，研究TRiC/CCT复合体对mTORC1关键组分表达及下游底物磷酸化水平的影响。结果 免疫共沉淀实验证实TRiC/CCT复合体各亚基与mTORC1均存在相互作用；雷帕霉素抑制mTORC1活性后，β-actin、β-Tubulin及STAT3不溶性蛋白表达量无明显增加，且在非变性电泳凝胶中复合体分子大小无明显改变，证明mTORC1对TRiC/CCT复合体的形成不存在调控作用；在HEK-293T中静默CCT2或CCT5后，mTOR、Raptor、mLST8蛋白表达水平降低，且磷酸化的p70S6K及Akt水平降低，证实TRiC/CCT复合体对mTORC1及下游分子具有调控作用。结论 TRiC/CCT复合体通过调控mTORC1各组分的蛋白表达水平，进而影响其下游底物的磷酸化水平及活性状态。

关键词

mTORC1 / TRiC/CCT复合体 / 蛋白质折叠 / 分子伴侣