玄丹清金颗粒通过Hh-Ptch/Smo-Gli调节轴抑制肿瘤干细胞特性逆转奥希替尼耐药

摘要

目的 探讨玄丹清金颗粒对奥希替尼耐药的人肺腺癌PC9/OR细胞的逆转作用及机制。方法 构建奥希替尼耐药的人肺腺癌细胞PC9/OR,CCK-8检测不同浓度奥希替尼对PC9和PC9/OR的增殖能力的影响及不同梯度浓度玄丹清金颗粒含药血清对PC9/OR增殖的影响，Western blot和qRT-PCR鉴定PC9/OR耐药性及肿瘤干细胞特性，软琼脂克隆形成实验检测细胞成球能力，侧群分选测定肿瘤干细胞比例，应用转录组测序筛选肿瘤干细胞相关调控通路并利用Western blot反向验证。结果 与PC9相比，PC9/OR的奥希替尼IC₅₀值显著升高，奥希替尼对p-EGFR、p-ERK和p-RPS6的抑制被明显削弱，与干细胞特性相关的调控分子亦呈不同程度上调。CCK-8检测提示以培养液稀释的40%及以下浓度含药血清可排除大鼠血清的细胞毒性干扰。CCK-8及克隆形成实验提示奥希替尼与玄丹清金颗粒含药血清的联合组PC9/OR细胞存活率及成球能力显著下降。侧群分选证实联合组干细胞比例显著下调。RNA-seq发现与肿瘤干细胞调节相关的PTCH2、SMO、GLI1、GLI2、GLI3发生显著变化。反证实验发现联合组加入激活剂（purmorphamine, PM）后，克隆形成及细胞存活率升高，OCT4、NANOG、SOX2、SHH、SMO、GLI1、GLI2上调，PTCH2下调。结论 玄丹清金颗粒能够通过抑制肿瘤干细胞特性逆转PC9/OR耐药，具体机制与调控Hh-Ptch/Smo-Gli调节轴相关。

关键词

肿瘤干细胞 / 奥希替尼 / 耐药 / 玄丹清金颗粒