miR-29b通过KLF4调控血管平滑肌细胞增殖及表型蛋白表达

摘要

目的 探讨微小RNA-29b(microRNA-29b, miR-29b)通过靶向作用于Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)信号通路对血管平滑肌细胞增殖及表型蛋白表达的影响。方法 将血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)分为4组：无义序列对照组(control+NC)、miR-29b过表达对照组(control+miR-29b)、无义序列模型组(ox-LDL+NC)、miR-29b过表达模型组(ox-LDL+miR-29b)。对照组细胞正常培养；模型组细胞采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)诱导24 h建立模型。细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测VSMCs的增殖情况；实时荧光定量PCR检测miR-29b、单核细胞化学趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、MCP-3、α平滑肌肌动蛋白(smooth muscle α-actin, SM α-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain, SM MHC)及KLF4的mRNA表达水平；酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒检测培养上清中MCP-1、MCP-3水平；Western blot检测蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验检测miR-29b对KLF4的靶向作用。结果 ox-LDL刺激VSMCs后，细胞中miR-29b表达量显著下降。与ox-LDL+NC组相比，ox-LDL+miR-29b组细胞增殖减少，炎症因子MCP-1和MCP-3的表达降低，收缩表型蛋白SM α-actin、SM MHC的表达显著升高，KLF4表达下降。双荧光素酶报告基因实验结果表明，miR-29b能与KLF4 mRNA的3′端非翻译区(3′UTR)结合。过表达KLF4可抑制miR-29b的作用。结论 miR-29b可靶向作用于KLF4,调控ox-LDL诱导的VSMCs增殖、炎症因子的表达及表型蛋白表达的变化。

关键词

微小RNA-29b / KLF4 / 血管平滑肌细胞 / 氧化低密度脂蛋白