miR-17通过调控自噬影响TGF-β1诱导的肺纤维化

摘要

目的 探讨miR-17对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的体外肺纤维化细胞模型自噬和纤维化的影响机制。方法 重组人TGF-β1蛋白诱导人胚肺成纤维细胞HFL1,构建肺纤维化细胞模型，CCK-8检测细胞活力，ELISA试剂盒检测细胞上清中羟脯氨酸(Hyp)含量，鉴定造模成功与否。将细胞分成对照组、模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、miR-17 inhibitor组和miR-17 inhibitor+3-MA组。CCK-8检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62和纤维化标志物α-SMA、CollagenⅠ蛋白的表达。结果 TGF-β1诱导后HFL1细胞活力升高(P<0.01),细胞上清中Hyp含量升高(P<0.01),体外肺纤维化细胞模型构建成功。与对照组相比，模型组细胞活力显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著升高(均P<0.01);与模型组相比，miR-17 inhibitor组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著降低(均P<0.01);与3-MA组相比，miR-17 inhibitor+3-MA组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著降低(均P<0.01)。结论 抑制miR-17可通过激活自噬抑制TGF-β1诱导的肺纤维化。

关键词

miR-17 / 肺纤维化 / 自噬