人主动脉血管平滑肌细胞铁死亡模型的建立

摘要

目的 在人主动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)中建立铁死亡模型并进行验证。方法 主动脉平滑肌细胞来源于在华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科行心脏移植手术的供体主动脉弓组织，分别使用含Imidazole ketone erastin(IKE)和胱氨酸缺失(CD)的培养液对HAVSMCs进行铁死亡诱导，并使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒、人乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒、细胞流式检测及免疫荧光染色来判断平滑肌细胞的铁死亡模型是否建立成功。结果对HAVSMCs进行铁死亡诱导后，光学显微镜下可观察到细胞出现明显形态学改变，流式细胞学分析显示IKE/CD诱导下碘化丙啶(PI)染色阳性细胞所占比例明显升高；CCK-8和LDH检测结果显示，在IKE/CD诱导下HAVSMCs细胞活力明显降低，细胞损伤率明显增加，而铁死亡抑制剂ferrostatin-1则能逆转铁死亡诱导对细胞的毒性作用；BODIPY-C11细胞流式分析及4-羟基壬烯醛(4-HNE)免疫荧光染色显示，IKE/CD诱导的HAVSMCs中脂质过氧化水平明显上升。结论 该研究使用IKE以及胱氨酸缺失培养液成功建立了人主动脉血管平滑肌细胞铁死亡模型，为后续研究提供了实验基础。

关键词

主动脉 / 血管平滑肌细胞 / 铁死亡