BPTF介导SLC40A1调节铁死亡促进胶质瘤生长、侵袭和转移的机制研究

摘要

目的 通过体内外实验验证溴结构域PHD指转录因子(BPTF)通过调节胶质瘤细胞中溶质载体家族40成员1(SLC40A1)表达影响胶质瘤发展和铁死亡的机制。方法 U87MG细胞分为sh-NC组、sh-BPTF组、sh-BPTF+ov-NC组和sh-BPTF+ov-SLC40A1组，采用慢病毒建立稳定转染的细胞系，采用qRT-PCR和Western blot验证转染效率。CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；细胞经皮下注射裸鼠并检测肿瘤生长情况；相应试剂盒检测细胞中活性氧(ROS)水平、铁含量、丙二醛(MDA)含量和还原性谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值以评价细胞铁死亡情况；免疫共沉淀(Co-IP)实验用于验证BPTF和c-Myc蛋白相互作用；染色质免疫共沉淀(ChIP)实验用于验证BPTF和c-Myc结合SLC40A1启动子；双荧光素酶报告基因实验用于验证BPTF影响SLC40A1转录。结果 敲减BPTF降低胶质瘤细胞中SLC40A1表达，抑制细胞体外增殖、迁移、侵袭和体内肿瘤生长，增加细胞中铁含量、ROS水平和MDA含量并降低细胞中GSH/GSSG比值。过表达SLC40A1逆转敲减BPTF对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和体内肿瘤生长的抑制作用，降低细胞中铁含量、ROS水平和MDA含量并增加细胞中GSH/GSSG比值。胶质瘤细胞中BPTF与c-Myc蛋白相互作用。SLC40A1启动子存在c-Myc的潜在结合位点，且BPTF和c-Myc蛋白结合SLC40A1启动子。敲减BPTF降低SLC40A1启动子的转录活性，且结合位点突变后敲减BPTF不影响SLC40A1启动子的转录活性。结论 BPTF可能通过与c-Myc相互作用上调其下游靶基因SLC40A1表达，从而抑制胶质瘤细胞铁死亡并促进胶质瘤发展。

关键词

胶质瘤 / BPTF / SLC40A1 / 铁死亡 / c-Myc