人神经干细胞移植对缺氧缺血性脑病大鼠神经修复的研究

摘要

目的 探究移植人神经干细胞(hNSCs)治疗新生大鼠中、重度缺氧缺血性脑病(HIE)及后遗症期对神经的保护机制。方法 取80只7日龄雄性SD大鼠，随机取其中55只采用Rice-Vannucci法制备HIE模型，建模后24 h对存活模型鼠采用Longa评分筛选出中、重度神经损伤大鼠并随机分为HIE+PBS组(PBS组，n=23)、HIE+hNSCs组(NSC组，n=23),从剩余25只大鼠中随机取23只作为假手术组(Sham组，n=23),Sham组只游离右侧颈总动脉，不予离断，也不予缺氧处理。三组同步给予药物抗排斥反应，PBS组与NSC组在建模后3 d分别经右侧脑室注射5μL PBS溶液或hNSCs悬液。移植后10 d,三组各随机取15只大鼠采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测脑内血管内皮生长因子(VEGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)含量，采用免疫荧光染色观察两种因子在脑内的分布情况。移植后12周，通过免疫荧光染色观察NSC组大鼠脑内hNSCs的迁移、分化，以水迷宫实验对三组各剩余的8只大鼠进行神经功能检测。结果 移植后10 d, NSC组VEGF、BDNF两种因子含量均最多，PBS组次之，Sham组最少，NSC组两种因子含量均显著高于Sham组(均P<0.05)。移植后12周，hNSCs向HIE大鼠两侧脑半球迁移，以右侧为主，成熟神经元分化率约30%。移植后12周，水迷宫实验中，PBS组潜伏期均长于Sham组及NSC组(均P<0.05),PBS组穿越平台次数均少于Sham及NSC组(均P<0.05);而Sham组与NSC组结果比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 脑室移植hNSCs通过加强HIE大鼠脑内VEGF、BDNF的旁分泌效应，及迁移并分化为神经元的替代作用，从而促进HIE大鼠后遗症期神经损伤的修复，为HIE治疗提供新思路。

关键词

新生儿缺氧缺血性脑病 / 脑源性神经营养因子 / 细胞迁移 / 细胞分化 / 水迷宫

基金资助

国家重点研发计划项目（No.2017YFA0104200,No.2018YFA0108601）