乙氧基二氢血根碱靶向EGFR抑制结直肠癌细胞恶性生物学行为并诱导凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨乙氧基二氢血根碱(ethoxydihydrosanguinarine, ESG)对结直肠癌细胞的抑制及具体分子机制。方法 选用结直肠癌细胞系RKO和HRT-18。实验分为空白对照组和加药组(1.0、1.5、2.0μmol/L ESG)。通过CCK-8法、实时无标记细胞分析技术(real time cellular analysis, RTCA)及克隆形成实验检测ESG对细胞增殖能力的影响；以流式细胞术、DAPI染色、JC-1线粒体膜电位和活性氧检测试剂盒检测ESG对细胞凋亡的影响；通过高内涵成像分析技术及Transwell侵袭实验检测ESG对细胞侵袭、迁移的影响；Western blot检测细胞凋亡及侵袭、迁移相关蛋白的表达，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)以及下游Akt/ERK信号通路蛋白的表达及磷酸化水平；通过过表达EGFR和敲低EGFR探讨EGFR在ESG诱导结直肠癌细胞凋亡、抑制细胞增殖及侵袭迁移过程中的作用；通过分子对接、靶点稳定性药物亲和反应实验以及微量热泳动实验检测ESG与EGFR的直接结合作用。结果 ESG显著抑制结直肠癌细胞的增殖及克隆形成能力；ESG诱导结直肠癌细胞发生线粒体途径凋亡并抑制其侵袭、迁移能力；ESG直接结合EGFR的激酶活性区而抑制其活性，进而下调其下游与肿瘤恶性进展相关的信号分子Akt、ERK的磷酸化水平。结论 ESG靶向结合并抑制EGFR,进而通过其下游Akt/ERK信号通路抑制结直肠癌细胞侵袭、迁移并诱导线粒体途径的细胞凋亡，有望成为靶向EGFR治疗结直肠癌的新型靶向药物。

关键词

结直肠癌 / 乙氧基二氢血根碱 / 表皮生长因子受体 / 侵袭 / 迁移 / 凋亡

基金资助

国家自然科学基金资助项目（No.82072928）; 湖北省卫生健康委指导性项目（No.WJ2023F079）; 湖北医药学院研究生科技创新项目（No.YC2022032）; 2022年大学生创新创业训练计划项目（No.202210929007）; 2023年大学生创新创业训练计划项目（No.S202310929001）