线粒体裂变因子对OGD/R诱导的PC12细胞线粒体凋亡通路的影响

摘要

目的 探究线粒体裂变因子(mitochondrial fission factor, MFF)在氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation, OGD/R)处理的PC12细胞中的表达及其对线粒体凋亡通路的影响。方法 选用PC12细胞系构建体外缺血性神经元损伤模型。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)实验明确MFF mRNA和蛋白在不同处理时间点的表达情况。通过RNA干扰技术沉默MFF基因表达，利用qRT-PCR、Western blot检测MFF mRNA和蛋白的表达情况；CCK-8检测沉默MFF对OGD/R处理的PC12细胞活力的影响；JC-1和试剂盒检测线粒体膜电位、腺苷三磷酸(adenosine triphosphate, ATP)和活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平变化；Western blot检测细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)、Bax和Bcl2的表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测Caspase-3和Caspase-9的活性变化。结果 MFF在体外OGD/R诱导的PC12细胞中的mRNA和蛋白含量明显升高。MFF沉默增强了OGD/R损伤后PC12细胞的活力，降低了细胞凋亡率，并促进Bcl2和抑制Bax蛋白的表达。敲低MFF明显提高了OGD/R处理后PC12细胞的线粒体膜电位，促进ATP合成，降低ROS含量，抑制线粒体细胞色素C释放和Caspase-3和Caspase-9的活性。结论 沉默MFF基因显著提高了OGD/R处理后PC12细胞的存活率，改善了线粒体功能。

关键词

线粒体凋亡 / 氧糖剥夺/复氧模型 / PC12细胞 / 线粒体裂变因子