微管抑制及尾桥蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞U2OS微核形成

摘要

目的 探讨微管及微管相关蛋白尾桥蛋白在肿瘤细胞微核形成中的作用。方法 利用DAPI染色检测不同类型细胞自发微核率；利用诺考达唑(nocodazole)抑制微管聚集后，DAPI染色和胞质分裂阻滞(cytokinesis-block, CB)微核实验观察人骨肉瘤细胞株U2OS中微核形成情况；免疫荧光多重染色检测诺考达唑处理不同时间对U2OS细胞中微管及尾桥蛋白的影响；在U2OS细胞中过表达尾桥蛋白或利用collybistin使尾桥蛋白磷酸化，再利用免疫荧光及DAPI染色检测其对微管及微核形成的影响。结果 相对于人胚肾HEK293细胞和原代神经细胞，U2OS自发微核率更高；诺考达唑处理使U2OS细胞微核数量增加，且与释放时间相关；诺考达唑处理使尾桥蛋白分布改变，逐渐聚集于细胞核；U2OS细胞中磷酸化尾桥蛋白主要表达于分裂期细胞；过表达尾桥蛋白和(或)增加其磷酸化水平并不影响U2OS细胞中微管蛋白的表达，但过表达尾桥蛋白并增加其磷酸化水平可使微核数量增多。结论 肿瘤细胞内微核形成与微管聚集能力关系密切，可形成于细胞周期不同时期，具有积累效应。尾桥蛋白磷酸化后细胞中微核数量增多，提示其可能参与调节肿瘤细胞微核形成。

关键词

微管 / 微核 / 尾桥蛋白 / 诺考达唑 / collybistin / U2OS

基金资助

国家级大学生创新训练项目(No.202211072019); 湖北省中医药管理局科研项目(No.ZY2023F142); 江汉大学校级自然科学基金项目(No.2021yb135)