MVP对人肾癌细胞功能的影响及机制研究

摘要

目的 观察敲低穹窿主体蛋白（major vault protein, MVP）表达对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法 qRT-PCR和Western blot检测人肾小管上皮细胞（HK2）和人肾癌细胞株（786-O、769-P、ACHN）中MVP基因的基础表达水平，筛选MVP显著高表达的细胞株作为实验细胞株；在候选肾癌细胞中敲低MVP表达，通过细胞克隆形成、EdU、细胞周期、细胞划痕、Transwell实验等方法观察敲低MVP表达对人肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响；通过Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达变化；通过通路激活剂确定MVP基因调控肾癌细胞生物学行为的作用机制。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示，相比HK2细胞，在786-O、769-P、ACHN细胞中MVP的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P<0.05）,且在769-P细胞中最为显著。在769-P细胞中敲低MVP表达后，细胞克隆形成能力明显减弱（P<0.01）;EdU阳性细胞数明显减少（P<0.01）;处于S期的细胞占比减少（P<0.01）,而处于G₂期的细胞占比增加（P<0.01）;细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制（均P<0.01）;p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达降低（均P<0.01）。在敲低MVP的同时给予PI3K激活剂740Y-P,可见p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达升高（均P<0.01）;因敲低MVP导致的细胞增殖、迁移、侵袭能力的抑制同样被740Y-P逆转（均P<0.01）。结论 敲低MVP基因可以抑制人肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭，这种抑癌作用可能是通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活而实现。

关键词

穹窿主体蛋白 / 肾癌 / 增殖 / 迁移 / 侵袭 / PI3K/Akt/mTOR信号通路