PPARγ基因沉默的人骨髓基质细胞对骨髓抑制小鼠造血功能的影响

摘要

目的 观察过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-gamma, PPARγ)基因沉默的人骨髓基质细胞HS-5对骨髓抑制小鼠造血功能的影响，并初步探讨其可能的作用机制。方法 用X射线进行全身照射构建骨髓抑制小鼠模型，造模后2 h,将小鼠随机分为3组，分别为实验组(尾静脉注射PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、对照组(尾静脉注射未行PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、空白组(尾静脉注射等量的生理盐水),每组5只。各组于放疗前、放疗后24 h、放疗后1周、放疗后2周进行外周血常规检测。对HS-5细胞在体外进行成骨、成脂诱导，分为实验组(PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、对照组(未干扰PPARγ的HS-5细胞)、空白组(未行成骨/成脂诱导分化的HS-5细胞),观察成骨/成脂染色情况。采用CCK-8实验检测PPARγ基因沉默的HS-5细胞对小鼠骨髓造血干细胞(hemopoietic stem cell, HSC)增殖的影响，分为实验组(PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后，与小鼠HSC共培养)、阳性对照组(50μmol/L PPARγ抑制剂处理的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后，与小鼠HSC共培养)、阴性对照组(未干扰PPARγ的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后，与小鼠HSC共培养)、空白组(小鼠HSC单独培养，不与HS-5细胞共培养)。结果 放疗后，各组小鼠血常规指标均呈先降低后升高趋势，放疗后1周，三组小鼠血小板、白细胞水平差异显著，且实验组>对照组>空白组(均P<0.05);放疗后2周，三组小鼠脂肪空泡面积百分比差异显著，且实验组<对照组<空白组(均P<0.05),经Pearson相关分析显示，血常规各指标与血清PPARγ表达水平呈负相关(均P<0.05),与脂肪空泡面积百分比呈负相关(均P<0.05)。在体外成骨/成脂诱导分化后，实验组与对照组相比，橙红色的细胞比例明显降低，红色钙结节比例明显增高；成骨分化诱导3 d后，实验组、阳性对照组、阴性对照组人骨髓基质细胞均与小鼠HSC细胞进行共培养，空白组则单纯培养HSC细胞，结果显示共培养24、48、72 h后，实验组、阳性对照组小鼠HSC细胞增殖水平均高于阴性对照组和空白组(均P<0.05)。结论 PPARγ基因沉默的HS-5植入骨髓抑制小鼠后有助于小鼠造血功能增强。PPARγ基因被干扰沉默后，可增强HS-5细胞的成骨分化能力，减弱HS-5细胞的成脂分化能力，而成骨分化诱导的HS-5细胞能进一步增强小鼠HSC的增殖能力。

关键词

过氧化物酶体增殖激活受体γ / 人骨髓基质细胞 / 骨髓抑制小鼠 / 造血功能 / 成骨/成脂分化

基金资助

四川省科技计划项目（No.2020YJ0339）; 四川省泸州市科技计划项目（No.2019-SYF-36）