甘草次酸通过HIF-1α/BNIP3介导的线粒体自噬改善索拉非尼诱导的心肌细胞损伤及凋亡

摘要

目的 基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路，探究甘草次酸对索拉非尼诱导的心肌细胞损伤及凋亡的影响。方法 MTT检测筛选甘草次酸作用于大鼠心肌细胞H9c2的浓度，随后将实验分为Control组、索拉非尼组、索拉非尼+甘草次酸组、索拉非尼+甘草次酸+HIF-1α抑制剂YC-1组、索拉非尼+甘草次酸组+YC-1+自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)组。试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量、丙二醛(MDA)水平，荧光探针法测定细胞内总活性氧(ROS)水平，流式细胞术检测细胞凋亡，免疫荧光法检测LC3蛋白的表达及BNIP3与LC3的细胞内共定位，Western blot检测线粒体自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin-1的表达，qRT-PCR及Western blot分别检测HIF-1α、BNIP3 mRNA及蛋白的表达水平。结果 相对于索拉非尼组，添加100、200μmol/L甘草次酸处理的H9c2细胞活力显著提升(均P<0.05)。相对于Control组，索拉非尼组H9c2细胞的LDH释放量、MDA及ROS水平显著上调，细胞的凋亡率显著升高，细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白的表达水平明显降低，p62水平显著上调，细胞中LC3荧光强度减弱，LC3和BNIP3共定位荧光强度减弱，HIF-1α、BNIP3 mRNA及蛋白的表达显著下调(均P<0.05);相对于索拉非尼组，索拉非尼+甘草次酸组H9c2细胞的LDH释放量、MDA及ROS水平显著下调，细胞的凋亡率显著降低，细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白的表达水平显著上调，p62水平显著下调，细胞中LC3荧光强度增强，LC3和BNIP3共定位荧光强度增强，HIF-1α、BNIP3 mRNA及蛋白的表达显著上调(均P<0.05);YC-1能显著逆转以上指标(均P<0.05),RAPA能显著抑制YC-1的作用(均P<0.05)。结论 甘草次酸能够通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路促进线粒体自噬抑制索拉非尼诱导的心肌细胞损伤及凋亡。

关键词

甘草次酸 / HIF-1α/BNIP3 / 线粒体自噬 / 索拉非尼 / 心肌细胞