康复新液通过miR-449a/Notch1轴改善脂多糖诱导的口腔黏膜上皮细胞炎症损伤

摘要

目的 探究康复新液(KFX)对脂多糖(LPS)诱导的口腔黏膜上皮细胞(OMECs)炎症损伤的影响及其机制。方法 体外分离、鉴定、培养小鼠口腔黏膜上皮细胞(mOMECs),以不同稀释倍数(0、0.078%、0.156%、0.313%、0.625%、1.25%、2.5%、5%、10%)KFX及不同浓度(0、0.1、1、10μg/mL)LPS分别处理mOMECs 48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡水平，确定KFX和LPS干预的最佳浓度。将mOMECs分为对照组(Control)、LPS组(1μg/mL LPS)、KFX组(0.625%KFX)、KFX+抑制剂对照组(KFX+inhibitor-NC)、KFX+miR-449a抑制剂组(KFX+miR-449a inhibitor)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡水平，ELISA检测细胞培养上清中TNF-α和IL-1β水平，qRT-PCR检测细胞中miR-449a和Notch1 mRNA表达水平，Western blot检测细胞中Notch1、cleaved-Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。通过生物信息学方法预测miR-449a与Notch1的靶向结合位点，双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和Western blot验证miR-449a与Notch1的靶向调控关系。结果 与Control组比较，LPS组细胞增殖活性、miR-449a和Bcl-2蛋白表达水平降低(均P<0.05),细胞凋亡率，TNF-α和IL-1β水平、Notch1 mRNA及Notch1、cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高(均P<0.05);与LPS组比较，KFX组细胞增殖活性、miR-449a表达水平和Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞凋亡率，TNF-α和IL-1β水平，Notch1 mRNA及Notch1、cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低(均P<0.05);与KFX组比较，KFX+miR-449a inhibitor组上述指标变化趋势与之相反(均P<0.05),而KFX+inhibitor-NC组无显著变化(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和Western blot结果表明，miR-449a靶向抑制Notch1表达。结论 KFX可能通过miR-449a/Notch1轴改善LPS诱导的mOMECs炎症损伤。

关键词

康复新液 / miR-449a/Notch1轴 / 脂多糖 / 口腔黏膜上皮细胞 / 炎症损伤