补肾化痰方调控β₂AR/cAMP-PKA-CREB通路减轻去卵巢大鼠骨质疏松

摘要

目的 研究补肾化痰方（BSHT）对绝经后骨质疏松症模型大鼠环磷酸腺苷（cAMP）-蛋白激酶A（PKA）-cAMP效应元件结合蛋白（CREB）信号通路及β₂肾上腺素能受体（β₂ adrenergic receptor, β₂AR）通路的影响。方法 取SD大鼠30只，随机分为假手术（Sham）组、模型（OVX）组、BSHT组，每组10只，去卵巢法复制绝经后骨质疏松模型。从造模后第5周开始，各组分别以生理盐水（Sham组和OVX组）或BSHT药液（BSHT组）灌胃；于造模第12周末处死大鼠，取材后进行指标检测。采用微型计算机断层扫描技术（micro CT）检测大鼠股骨的微结构；采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测骨组织中相关信号通路分子，如β₂AR、PKA、CREB的基因和蛋白表达水平；采用免疫组织化学法（immunohistochemistry, IHC）检测蛋白的组织定位。结果 与Sham组相比，OVX组大鼠的骨微结构指标，包括骨密度（bone mineral density, BMD）、骨体积分数（bone volume fraction, BV/TV）、骨小梁厚度（trabecular thickness, Tb.Th）、骨小梁数量（trabecular number, Tb.N）均明显下降，骨小梁分离度（trabecular separation, Tb.Sp）升高；信号通路指标中，PKA、CREB的mRNA及蛋白表达水平明显下降，β₂AR mRNA及蛋白表达明显增加（均P<0.05）。与OVX组相比，BSHT组大鼠的骨微结构相关指标（BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N）及PKA、CREB表达明显增加，而Tb.Sp、β₂AR表达水平明显下降（均P<0.05）。IHC结果显示骨小梁周边的成骨细胞和骨髓基质细胞的胞质中，β₂AR、PKA、CREB呈阳性表达。结论 BSHT能够通过调节去势骨质疏松症大鼠β₂AR及cAMP-PKA-CREB信号通路，影响骨重建，从而起到防治骨质疏松的作用。

关键词

补肾化痰方 / β₂肾上腺素能受体 / cAMP-PKA-CREB信号通路 / 绝经后骨质疏松症