牛初乳免疫球蛋白M的分离纯化及多克隆抗体制备

摘要

本研究旨在从牛初乳中分离纯化免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM),并作为抗原免疫BALB/c小鼠，制备鼠抗牛IgM多克隆抗体.将牛初乳离心脱脂和盐析后，采用Sephacryl S-300凝胶层析与DEAE-Sepharose 4FF离子交换层析结合，对牛初乳中IgM分离纯化，利用SDS-PAGE对得到的高纯度IgM进行鉴定，并将纯化后的IgM作为抗原，通过免疫注射的方式，制备鼠抗牛IgM多克隆抗体，利用ELISA、Western blot等方法对其抗体进行效价测定和鉴定.结果表明，分离纯化的IgM的重链分子量为87.977±0.997 kDa,轻链分子量为25.952±0.160 kDa,纯度达94%以上，ELISA结果显示多克隆抗体的效价为1∶512 000,Western blot显示单一特异性条带，说明该多克隆抗体与牛IgM蛋白发生特异性反应，证明该抗体具有特异性.本研究成功从牛初乳中分离纯化了高纯度的牛初乳IgM,获得了高效价的鼠抗牛IgM多克隆抗体.

关键词

牛初乳 / IgM / 层析 / 多克隆抗体 / 免疫血清 / 抗体效价