内异停方通过TREM1/TLR4/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞M1极化预防子宫内膜异位症术后复发

摘要

目的 探讨内异停（Neiyiting, NYT）方预防子宫内膜异位症（endometriosis, EMs）术后复发的机制。方法 分别建立了EMs术后复发动物模型以及子宫内膜间质细胞（hEM15A）与巨噬细胞（RAW 264.7）共培养实验模型，以进行体内外实验。采用自体移植法建立EMs大鼠模型后，依据给药分组（每组6只）：模型组（Model组，蒸馏水）、孕三烯酮组（Gestrione组，孕三烯酮0.325 mg/kg）、低剂量内异停方组[NYT-L组，内异停方5.04 g/(kg·d)]和高剂量内异停方组[NYTH组，10.08 g/(kg·d)]，连续灌胃3周。随机选取6只SD大鼠作为对照组（Control组），蒸馏水灌胃连续3周。观察EMs大鼠复发性病变的大小及其病理变化；免疫组化和qRT-PCR检测体内M1巨噬细胞标志物CD86蛋白和mRNA的表达；免疫组化和qRT-PCR检测髓样细胞表达的触发受体-1(triggering receptor expressed on myeloid cells 1, TREM1)/Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)信号通路相关指示蛋白和mRNA的表达。观察细胞共培养实验中hEM15A细胞的增殖情况，流式细胞术检测RAW 264.7巨噬细胞的极化，qRT-PCR检测iNOS和IL-1β mRNA的表达。Western blot检测体外信号通路相关指示蛋白的表达。ELISA法检测体外炎症因子的水平。结果 与模型组相比，NYTH组的复发病灶体积缩小（P<0.01）。巨噬细胞M1极化检测结果表明，与对照组相比，模型组复发病灶中CD86的蛋白和mRNA表达均升高（P<0.01）；与模型组相比，NYT-H组复发病灶中CD86的蛋白和mRNA表达下降（P<0.01）；同时RAW264.7细胞实验进一步验证了内异停方可以减少TREM1过表达质粒诱导的CD86阳性巨噬细胞数量，并降低诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）和白细胞介素1β(interleukin 1β, IL-1β)mRNA的表达（P<0.01）。hEM15A细胞增殖情况结果表明，内异停方下调巨噬细胞M1型极化诱导下hEM15A细胞中Ki-67蛋白水平（P<0.01）。TREM1/TLR4/NF-κB信号通路结果表明，与对照组相比，模型组复发病灶中TREM1、TLR4、NF-κB蛋白水平及mRNA表达均升高（P<0.01）；与模型组相比，NYT-H组复发病灶中TREM1、TLR4、NF-κB蛋白水平及mRNA表达均下降（P<0.01）；同时RAW 264.7细胞和hEM15A细胞的共培养实验进一步验证了内异停方降低TREM1、TLR4和p-P65蛋白水平（P<0.01）。结论 内异停方可以通过TREM1/TLR4/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞M1极化，改善炎症水平，从而抑制异位子宫内膜病灶形成，预防术后复发。

关键词

子宫内膜异位症 / 复发 / 巨噬细胞

基金资助

国家自然科学基金(No.82004398); 苏州市科技发展计划(医疗卫生科技创新)项目(No.SKY2022205、No.SKYXD2022058、No.SKY2023213); 苏州市卫生青年骨干人才“全国导师制”培训项目(苏卫健科教[2020]7号)资助