槲皮素通过抑制p38 MAPK/NOX4信号通路减轻H₂O₂诱导的人子宫内膜基质细胞氧化应激损伤

摘要

目的 探讨槲皮素对过氧化氢（hydrogen peroxide, H₂O₂）诱导人子宫内膜基质细胞（human endometrial stromal cells, HESCs）损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法 体外培养HESCs，加入不同浓度的槲皮素（0、10、20和40μmol/L）作用24 h，验证给予不同剂量的槲皮素对正常子宫内膜细胞没有毒性，随后采用250μmol/L H₂O₂孵育细胞12 h，建立H₂O₂诱导的HESCs损伤模型。槲皮素预处理24 h,H₂O₂刺激HESCs后，CCK-8检测细胞活力，筛选有效的干预剂量，随后将HESCs分为空白组、H₂O₂模型组、H₂O₂+槲皮素组，采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平；AnnexinⅤ/PI双染，流式细胞术检测槲皮素对H₂O₂诱导HESCs凋亡的影响；JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位；Western blot检测相关蛋白NADPH氧化酶4（NADPH oxidase 4, NOX4）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK）及磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）表达。结果 根据CCK-8实验结果，选择槲皮素20μmol/L为有效干预剂量。ROS检测显示，与空白组相比，H₂O₂模型组ROS的平均荧光强度升高（P<0.01），而与H₂O₂模型组相比槲皮素处理下调了ROS的平均荧光强度，减轻了氧化损伤（P<0.05）。细胞凋亡检测结果显示，H₂O₂模型组细胞凋亡率较空白组增加（P<0.01），而与槲皮素共同作用则逆转了细胞凋亡率的增加（P<0.05）。JC-1染色检测线粒体膜电位变化情况显示，与空白组相比，H₂O₂诱导所致的线粒体膜电位降低的细胞比例增加（P<0.01），而槲皮素处理后线粒体膜电位降低的细胞比例低于H₂O₂模型组（P<0.05）。Western blot结果显示，与空白组相比，H₂O₂模型组NOX4蛋白、p-p38 MAPK蛋白相对表达量升高（P<0.05）；而加入槲皮素后，与H₂O₂模型组相比，NOX4蛋白、p-p38 MAPK蛋白相对表达量降低（P<0.05）。结论 槲皮素预处理对H₂O₂诱导的HESCs氧化损伤具有保护作用，其机制可能是减少ROS过量累积以及抑制p38 MAPK/NOX4信号通路。

关键词

槲皮素 / 子宫内膜基质细胞 / 氧化应激 / 细胞凋亡 / 活性氧