miR-328-3p对氧化型低密度脂蛋白诱导的冠状动脉内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

摘要

目的 探讨miR-328-3p对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）诱导的冠状动脉内皮细胞损伤的保护作用及可能相关的作用机制。方法 用ox-LDL诱导人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery endothelial cells, HCAECs），将细胞分为对照（control）组（正常培养细胞）、ox-LDL组（ox-LDL处理）、ox-LDL+miR-NC组（转染miR-NC，用ox-LDL处理）、ox-LDL+miR-328-3p组（转染miR-328-3p，用ox-LDL处理）、ox-LDL+miR-328-3p+pcDNA组（共转染miR-328-3p和pcDNA，用ox-LDL处理）、ox-LDL+miR-328-3p+胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2, IGF2)组（共转染miR-328-3p和IGF2，用ox-LDL处理）。RT-qPCR检测miR-328-3p表达水平；MTT以及流式细胞术检测细胞增殖和凋亡；Western blot法检测cleaved cas-3、IGF2、Bax、Bcl-2蛋白含量；ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素（interleukin, IL）-6、IL-1β含量；应用双荧光素酶报告实验验证分子间靶向关系。结果 与control组相比，ox-LDL组中miR-328-3p表达水平、细胞活性降低（P<0.05），凋亡率，cleaved cas-3、IGF2蛋白表达，TNF-α、IL-6、IL-1β水平增加（P<0.05）。与ox-LDL+miR-NC组相比，ox-LDL+miR-328-3p组miR-328-3p表达水平、细胞活性增加（P<0.05），凋亡率，cleaved cas-3、IGF2蛋白表达，TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低（P<0.05）。IGF2是miR-328-3p的功能靶标。与共转染oxLDL+miR-328-3p+pcDNA组比较，共转染ox-LDL+miR-328-3p+IGF2组IGF2蛋白水平升高（P<0.05），细胞活性降低（P<0.05），而凋亡率、cleaved cas-3蛋白水平以及TNF-α、IL-6、IL-1β含量升高（P<0.05）。结论 miR-328-3p通过靶向负调控IGF2抑制ox-LDL诱导的冠状动脉内皮细胞凋亡和炎性损伤。

关键词

miR-328-3p / 胰岛素样生长因子2 / 氧化型低密度脂蛋白 / 冠状动脉内皮细胞