α-香附酮通过调控TLR4/NF-κB信号通路拮抗肠黏膜炎症反应缓解小鼠克罗恩病样结肠炎

摘要

目的 探讨α-香附酮（α-cyperone, CYP）对2,4,6-三硝基苯磺酸（2, 4, 6-trinitrobenzene sulfonic acid, TNBS）诱导的小鼠克罗恩病（Crohn's disease, CD）样结肠炎的作用效果及可能机制。方法 将小鼠随机平均分为野生（wild type,WT）组、TNBS组、CYP组和5-氨基水杨酸（5-ASA）组，每组10只。检测各组小鼠肠炎症状、肠屏障功能和结构及结肠中炎症因子[白细胞介素（interleukin, IL）-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、IL-1β及γ-干扰素（gammainterferon, IFN-γ）]表达水平。构建脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导Caco2细胞炎症模型，分为Control组、LPS组及LPS+CYP组，检测各组细胞紧密连接蛋白及炎症因子表达水平。采用基因本体（Gene Ontology, GO）功能富集分析预测CYP可能的作用途径与潜在的分子机制，并进行体内外验证。结果 体内研究中，与TNBS组相比，CYP组和5-ASA组小鼠体质量和结肠长度增加，而疾病活动度评分和组织学炎症评分降低（P<0.05）；异硫氰酸荧光素-葡聚糖水平、细菌移位率（肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结）降低，而跨上皮电阻（transepithelial electric resistance, TEER）值、闭锁小带蛋白-1(zonula occluden protein-1, ZO-1)及闭合蛋白-1(claudin-1)表达增加（P<0.05）；炎症因子表达降低（P<0.05）。体外研究中，与LPS组相比，LPS+CYP组中Caco2细胞的TEER值、ZO-1和claudin-1表达增加（P<0.05）；炎症因子表达降低（P<0.05）。富集分析发现CYP与炎症应答相关（P<0.001）。Western blot结果表明，CYP可显著降低体内外Toll样受体4(toll-like receptor 4, TLR4)/核因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)信号通路中关键蛋白的表达（P<0.05）。结论 CYP可能通过调控TLR4/NF-κB信号通路的表达，拮抗肠黏膜炎症反应来保护肠屏障，进而缓解TNBS诱导的小鼠CD样结肠炎。

关键词

克罗恩病 / 结肠炎 / α-香附酮 / 肠黏膜屏障 / TLR4/NF-κB