电膜萃取-液相色谱质谱法高通量检测尿液中内源性肽的研究

摘要

目的 建立一种基于电膜萃取-液相色谱质谱联用技术精准检测尿中肽的方法，并评估其在肿瘤标志物筛选的应用前景。方法 选取15种与疾病相关的肽作为目标分析物，采用含有5%二(2-乙基己基)磷酸酯的正辛醇作为支撑液膜，供体相为100 mmol/L甲酸与尿液1∶1混合液，受体相为20 mmol/L甲酸（含50%二甲基亚砜），40 V电压下电膜萃取15 min，受体相溶液经液相色谱串联质谱分析。初步将该方法应用于12例健康对照和7例泌尿系统肿瘤患者的尿样分析。结果 15种小分子肽在0.1～100.0 ng/mL范围内呈良好线性关系（r≥0.995），检出限为0.01～0.50 ng/mL，定量限为0.03～1.50 ng/mL，加标回收率为21.0%～71.2%，相对标准偏差为0.8%～20.0%(n=3)。小样本临床标本检测数据显示，肿瘤患者尿液中缓激肽1-5浓度（中位数0.65 ng/mL）高于健康对照组（中位数0.37 ng/mL），差异有统计学意义（P<0.05），有望成为泌尿系统肿瘤的特异性标志物。结论 本研究建立的电膜萃取-液相色谱质谱联用方法具有简便、高效、灵敏等优势，可实现尿液中痕量肽的精准检测，为疾病标志物筛查及电膜萃取技术的临床应用提供了可靠的方法学基础。

关键词

电膜萃取 / 微萃取 / 肿瘤标志物 / 尿液 / 肽