利舒康胶囊干预模型大鼠高原肺水肿的分子机制

摘要

目的 应用蛋白质组学方法探讨利舒康胶囊（Lishukang capsule, LSK）治疗大鼠高原肺水肿模型的作用靶点及信号通路。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照（Control）组、高原肺水肿模型（HAPE）组、利舒康胶囊处理低、中、高剂量组和红景天组。模型建立后通过HE染色、炎症因子检测、肺含水量和肺泡灌洗液中蛋白含量评价药效，并确定最佳给药剂量，运用非标记定量蛋白质组学技术检测并筛选利舒康最佳给药剂量组差异表达蛋白质，筛选标准为表达倍数变化1.5倍以上且P<0.05。采用蛋白质印迹法对差异表达蛋白质进行验证，并对其进行基因本体（GO）富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 利舒康中剂量组具有良好的抗HAPE作用，进一步进行蛋白质组学分析结果表明，与Control组相比，HAPE组共有差异表达蛋白267个，与HAPE组相比，LSK中剂量组共有225个差异表达蛋白，112个在Control组中差异表达的蛋白质在LSK中剂量组干预后得到纠正。对HAPE组与LSK组差异表达的蛋白质进行GO富集分析显示，这些差异表达蛋白质共涉及12个生物学过程、2个细胞组分和5个分子功能；KEGG富集分析表明，LSK能激活细胞黏附分子、糖胺聚糖生物合成、DNA复制/核苷酸切除修复、癌症中的转录调控异常、单纯疱疹病毒1型感染通路，能抑制甘油磷脂代谢通路。采用Western blot方法对一些潜在功能的差异蛋白进行验证，包括AGPAT5、NCAM1、SRSF3、PLA2这些差异蛋白在正常组、HAPE组及LSK组均出现显著表达且验证结果与蛋白质组学一致，表明蛋白质组学结果可信度较高。结论 LSK具有良好的抗高原肺水肿作用，通过蛋白质组学研究提示，LSK可能通过激活细胞黏附分子、糖胺聚糖生物合成、DNA复制/核苷酸切除修复、癌症中的转录调控异常、单纯疱疹病毒1型感染通路，抑制甘油磷脂代谢通路起到抗高原肺水肿作用，通路中关键差异蛋白可能在LSK防治高原肺水肿中起重要作用。

关键词

高原肺水肿 / 利舒康胶囊 / 高原缺氧 / 蛋白质组学 / 液相色谱-串联质谱