三叶豆苷通过调控MAPK信号通路减轻高血压所致肾脏细胞凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨三叶豆苷对高血压所致肾损伤的潜在治疗作用及其关键靶点和通路。方法 利用高通量基因表达数据库（GEO）分析高血压患者外周血临床样本的mRNA转录图谱，采用网络药理学方法筛选三叶豆苷治疗高血压所致肾损伤的关键靶点，通过基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对通路富集分析。取大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E，构建血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, AngⅡ）刺激的NRK-52E细胞模型，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot法检测凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、caspase-3）以及MAPK通路关键蛋白（ERK、p38MAPK、JNK）的磷酸化与总蛋白表达水平。结果 数据集GSE75360的分析结果显示，与正常人群相比，高血压患者外周血单核细胞中有3 331个基因上调，3 197个基因下调。网络药理学分析三叶豆苷具有472个潜在作用靶点（如CASP3、MAPK1）。蛋白质-蛋白质相互作用网络分析显示这些靶点与凋亡调控信号通路等密切相关。GO和KEGG通路富集分析提示：三叶豆苷在负向调控细胞凋亡过程、凋亡通路和MAPK信号通路等通路被显著富集。体外实验证实，与AngⅡ组相比，三叶豆苷干预能够抑制AngⅡ刺激后NRK-52E细胞的凋亡率，抑制Bax和cleaved caspase-3的表达，促进Bcl-2的表达以及抑制p38 MAPK、ERK、JNK的磷酸化（P<0.05）。结论 三叶豆苷通过抑制AngⅡ刺激的NRK-52E细胞凋亡，并调控MAPK信号通路，可能是其抗高血压所致肾损伤的重要机制之一。

关键词

三叶豆苷 / 高血压性肾病 / 细胞凋亡 / MAPK信号通路