GⅡ型诺如病毒逆转录环介导等温扩增技术检测方法的建立

摘要

目的 建立基于逆转录环介导等温扩增技术（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP）的GⅡ型诺如病毒快速检测方法。方法 通过NCBI数据库和在线程序Primer Explorer V5筛选诺如病毒基因保守区并设计特异性引物，经实验条件优化（包括反应温度、MgSO₄浓度、dNTP浓度等）构建检测体系，评价该方法的检测灵敏性和特异性。利用优化后的方法检测临床粪便样本，并与商品化试剂盒进行比较。结果 所建立的方法特异性良好，与腺病毒、人肠道通用型病毒及轮状病毒无交叉反应；灵敏性较好，检测限为51 copies/μL；检测时间为45 min;34份诺如病毒感染患者粪便样本与商品化试剂盒检测结果一致性较好，灵敏度为100%，特异度为83.33%,ROC曲线下面积为0.97（95%CI:0.92～1.00），表明该方法具有较高的准确性和可靠性。结论 本研究成功建立了基于RT-LAMP的GⅡ型诺如病毒检测方法，灵敏性、特异性及实际样本检测效果良好，适用于基层实验室和现场快速检测。

关键词

卫生检验学 / GⅡ型诺如病毒 / RT-LAMP / 现场检测

基金资助

国家自然科学基金（No.82373628、No.82473636）资助