实时荧光核酸恒温扩增检测技术在乙型肝炎病毒感染者低病毒载量样本检测中的优势分析及临床验证

摘要

目的 探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)在乙型肝炎病毒(HBV)感染者低病毒载量样本检测中的优势及其临床应用价值。方法 以逆转录实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测为参照,评估实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)的检测性能(包括线性范围、精密度和检出限)。两种方法检测样品均为HBV核糖核酸(RNA)国家标准品。共纳入170例慢性HBV感染者进行方法学比较,根据血清HBV DNA水平将其分为高水平组(>100 IU/mL,n=111)和低水平组(≤100 IU/mL,n=59),验证两种方法检测结果的相关性和一致性。进一步基于1006例慢性HBV感染患者数据分析HBV RNA的分布特征及其与HBV标志物的相关性。结果 SAT与RT-qPCR法检测HBV RNA相比,线性范围更宽(10～2～10～8 copies/mL vs.10～3～10～8 copies/mL),低浓度样本精密度更高(批内变异系数4.23%vs.12.82%),检出限更低(50 copies/mL vs.500 copies/mL)。在临床样本检测中,SAT法总体检出率高于RT-qPCR法(72.35%vs.57.64%,P<0.01),在HBVDNA低水平组中SAT法检出率亦高于RT-qPCR法(50.85%vs.28.81%,P=0.007)。大样本分析显示,在HBVDNA<20 IU/mL的患者中,仍有40.4%可检出HBVRNA,且HBsAg≥100 IU/mL者阳性率达55.5%。相关性分析显示,HBV RNA与HBsAg(r=0.506)及HBeAg(r=0.454)均呈中等强度正相关,与ALT(r=-0.098)及AST(r=-0.082)呈微弱负相关(P均<0.05)。结论 SAT法在检测低水平HBV RNA时具有更高的灵敏度与稳定性。HBV RNA可作为评估病毒转录活性的血清学标志物,在HBV DNA阴性或低水平患者的临床管理中具有应用价值。

关键词

乙型肝炎病毒 / 实时荧光核酸恒温扩增检测技术 / 临床试验 / 超低限检测 / 共价闭合环状DNA(cccDNA)