SLC1A5-TM4SF1复合物对食管鳞状细胞癌细胞顺铂耐药的调控作用及机制

摘要

目的 探讨氨基酸转运载体溶质载体家族1成员5(SLC1A5)-四跨膜蛋白超家族成员1(TM4SF1)复合物对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞顺铂耐药的调控作用及分子机制。方法 通过慢病毒载体构建SLC1A5稳定过表达的Eca109细胞，通过细胞活力试验检测SLC1A5对细胞顺铂敏感性的影响。采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测SLC1A5在Eca109细胞及顺铂耐药Eca109细胞(Eca109-R)中的表达。在Eca109-R细胞中通过慢病毒载体敲低SLC1A5表达，检测敲低SLC1A5表达后细胞对顺铂的敏感性。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC1A5敲低对Eca109-R细胞中DNA损伤修复关键基因表达的影响。在SLC1A5敲低的Eca109-R细胞中，通过细胞活力试验检测过表达RAD50后细胞对顺铂的敏感性。在Eca109细胞中，利用慢病毒载体分别或共同过表达SLC1A5、TM4SF1,通过细胞活力试验检测SLC1A5-TM4SF1复合物对RAD50表达及细胞顺铂耐药的影响。结果 与对照细胞相比，过表达SLC1A5的Eca109细胞对顺铂的耐药性增强，差异有统计学意义(P<0.05)。Eca109-R细胞的SLC1A5蛋白表达升高，且与对照细胞相比，敲低SLC1A5表达的细胞对顺铂更敏感，差异有统计学意义(P<0.05)。顺铂处理条件下，RAD50基因表达水平在敲低SLC1A5后显著下调(P<0.05)。敲低SLC1A5会抑制RAD50蛋白表达，且与对照细胞相比，在SLC1A5敲低细胞中过表达RAD50可以大幅度恢复细胞对顺铂的耐药，差异有统计学意义(P<0.05)。SLC1A5与TM4SF1同时过表达可进一步上调RAD50表达，且与对照细胞相比，细胞对顺铂的耐药性增强，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SLC1A5-TM4SF1复合物通过上调RAD50表达，促进ESCC细胞对顺铂的耐药。

关键词

氨基酸转运载体溶质载体家族1成员5 / 四跨膜蛋白超家族成员1 / RAD50双链断裂修复蛋白 / 食管鳞状细胞癌 / 耐药 / 膜蛋白复合物