长链非编码RNA ZEB1反义RNA1通过靶向微小RNA-224调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制研究

摘要

目的 探讨长链非编码RNA ZEB1反义RNA1(LncRNA ZEB1-AS1)通过靶向微小RNA(miR)-224调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制。方法 体外培养淋巴瘤细胞系Raji,分别转染si-NC、si-ZEB1-AS1、miR-NC、miR-224 mimics、si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC、si-ZEB1-AS1+anti-miR-224。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)评估LncRNA ZEB1-AS1和miR-224在淋巴瘤细胞中的表达量；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力；采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力；通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA ZEB1-AS1对miR-224的调控作用；采用Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达水平。结果 与对照组比较，淋巴瘤组LncRNA ZEB1-AS1水平升高，miR-224表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较，si-ZEB1-AS1组中LncRNA ZEB1-AS1的表达水平、光密度(OD)值、迁移细胞和侵袭细胞数量，以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平均降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较，miR-224组miR-224表达水平提高，而OD值、细胞迁移和侵袭数量以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。上调miR-224水平可降低WT-ZEB1-AS1的荧光素酶活性，但不影响MUT-ZEB1-AS1的荧光素酶活性。与pcDNA-NC组相比，pcDNA-ZEB1-AS1组miR-224表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC组比较，si-ZEB1-AS1组miR-224表达升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组比较，si-ZEB1-AS1+anti-miR-224组的OD值、迁移和侵袭数量，以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平提高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 抑制LncRNA ZEB1-AS1从而靶向上调miR-224的表达，能够有效降低淋巴瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

关键词

长链非编码RNA ZEB1反义RNA1 / 淋巴瘤 / 微小RNA-224 / 增殖 / 迁移 / 侵袭

基金资助

上海市崇明区“可持续发展科技创新行动计划”项目(CKY2022-20)