微小RNA-15a-5p通过RUNX1增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性机制研究

摘要

目的 探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)影响胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移及胶质瘤细胞对替莫唑胺(TMZ)敏感性的机制。方法 选取胶质瘤细胞H4、SHG-44、正常星形胶质细胞HA1800及TMZ耐药H4细胞，将miR-NC、miR-15a-5p mimics质粒分别转染至H4细胞，记为miR-NC组、miR-15a-5p组；将Vector、OE-RUNX1质粒分别转染至miR-15a-5p组细胞，并分别用400μmoL/L TMZ处理，分别记为miR-15a-5p+Vector组、miR-15a-5p+RUNX1组、TMZ+Vector组及TMZ+RUNX1组。miR-NC组、miR-15a-5p组细胞用400μmoL/L TMZ处理，记为TMZ+miR-NC组、TMZ+miR-15a-5p组。未进行任何处理的细胞设为Control组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力。采用Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。采用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞RUNX1 mRNA及miR-15a-5p表达水平。采用Western blot检测细胞RUNX1蛋白表达水平。采用TargetScan在线网站预测miR-15a-5p与RUNX1的结合位点。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15a-5p与RUNX1的靶向关系。结果 H4、SHG-44细胞的RUNX1 mRNA及其蛋白表达水平高于HA1800细胞，H4、SHG-44细胞miR-15a-5p表达水平低于HA1800细胞，差异有统计学意义(P<0.000 1)。与Control组比较，TMZ耐药H4细胞miR-15a-5p表达水平降低，差异有统计学意义(t=18.89,P<0.000 1);与Control组比较，TMZ耐药H4细胞RUNX1 mRNA及其蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(t=34.11、18.07,P<0.000 1)。上调miR-15a-5p、TMZ均可抑制细胞的增殖、侵袭及迁移，而上调miR-15a-5p联合TMZ可显著抑制细胞的增殖、侵袭及迁移。miR-15a-5p可负性调控RUNX1表达。RUNX1过表达可逆转上调miR-15a-5p、TMZ对胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用。结论 miR-15a-5p负性调控RUNX1抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭、迁移，以及提高肿瘤细胞对TMZ的敏感性。

关键词

微小RNA-15a-5p / RUNX1基因 / 胶质瘤 / 替莫唑胺