透明细胞肾细胞癌中piR-35296表达对增殖的影响

摘要

目的 研究透明细胞肾细胞癌（ccRCC）中piR-35296的表达水平与病理意义以及对ccRCC细胞增殖的影响。方法 收集67例ccRCC患者手术切除标本及临床病理资料。通过piRNA基因芯片检测ccRCC中piRNA差异性表达谱，并用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）实验对差异性表达的piRNA进行验证。通过CCK-8实验检测piR-35296对ccRCC细胞增殖活性的影响。通过生物信息学预测TAB2是piR-35296的下游靶基因；通过qRT-PCR实验检测过表达piR-35296或敲低piR-35296表达对TAB2表达水平的影响。通过Rescue实验验证piR-35296对TAB2的调控以及对ccRCC细胞增殖的影响。分析实验性裸鼠实验中敲低piR-35296表达对皮下移植瘤生长的影响；通过增殖指标Ki-67免疫组化染色验证piR-35296对ccRCC细胞增殖的影响。结果 piRNA表达谱和qRT-PCR均检测出piR-352961在ccRCC中表达水平升高（P<0.05）。piR-35296的表达与ccRCC患者肿瘤大小和分化程度密切相关（χ²=3.984、3.974,P<0.05）。CCK-8增殖实验结果表明，过表达piR-35296能提高ccRCC细胞的增殖活性，降低piR-35296表达可抑制ccRCC细胞的增殖活性（P<0.05）。qRT-PCR实验发现，过表达piR-35296后TAB2表达上调，降低piR-35296表达后TAB2表达下调（P<0.05）。Rescue实验提示，piR-35296能促进ccRCC细胞的TAB2 mRNA及其蛋白表达，并促进ccRCC细胞增殖；降低TAB2表达可抑制ccRCC细胞增殖。实验性裸鼠实验中，降低piR-35296表达后，移植瘤质量和体积减小（P<0.05）。免疫组化染色Ki-67结果显示，降低piR-35296表达后，Ki-67阳性细胞比率降低，提示细胞增殖能力下降（P<0.05）。结论 在ccRCC中，piR-35296是一个新的促癌基因。piR-35296可通过提高TAB2的表达水平，促进ccRCC细胞的增殖。

关键词

肾细胞癌 / 透明细胞肾细胞癌 / piR-35296 / TAB2表达水平 / 细胞增殖