小胶质细胞P2Y₁₂受体在小鼠卒中后中枢痛中的作用和机制

摘要

目的 探讨小胶质细胞P2Y₁₂受体在小鼠卒中后中枢痛中的作用及机制。方法 选取无特定病原体（SPF）级雄性C57BL/6J小鼠32只，7～8周龄，体质量25～30 g,采用随机数字表法分为4组：假手术组（C组）、CPSP组、CPSP-M组(CPSP+P2Y₁₂受体拮抗剂MRS2395)、C-M组(假手术+P2Y₁₂受体拮抗剂MRS2395),每组8只。采用右侧丘脑腹后内侧核和腹后外侧核内注射10 nL 0.001 U/nLⅣ型胶原酶制备CPSP模型。CPSP-M组和C-M组在CPSP模型制备前30 min时腹腔注射MRS 2395（1.5 mg/kg）, 1次/d,连续注射5 d; C组和CPSP组给予等量生理盐水。造模前1 d（T₀）和造模后1、3、5 d（T₁、T₂、T₃）时测定热缩足潜伏期（TWL）、冷缩足潜伏期（CWL）和机械缩足反应频率（PWF）。随后处死小鼠取脑组织，采用免疫荧光法观察P2Y₁₂受体的表达部位，苏木精-伊红（HE）染色法观察脑组织病理改变，蛋白质印迹法检测脑组织P2Y₁₂受体、Toll样受体4（TLR4）、磷酸化核转录因子κB-p65（p-NF-κB p65）和NF-κB p65的表达水平。结果 P2Y₁₂受体在CPSP组脑组织内只表达于小胶质细胞中，星形胶质细胞和神经元中未表达。与C组比较，CPSP组和CPSP-M组T₁～T₃时TWL、CWL缩短，PWF升高，脑组织损伤程度加重，P2Y₁₂受体、TLR4和p-NF-κB p65表达上调，C-M组T₁～T₃时以上各项指标与C组比较，差异无统计学意义（P>0.05）;与CPSP组比较，CPSP-M组T₁～T₃时TWL、CWL延长，PWF降低，脑组织损伤程度减轻，P2Y₁₂受体、TLR4和p-NF-κB p65表达下调（P<0.05）。结论 小胶质细胞P2Y₁₂受体可能通过激活TLR4/NF-κB信号通路参与小鼠CPSP的形成。

关键词

P2Y₁₂受体 / 小胶质细胞 / 中枢神经系统 / 疼痛

基金资助

国家自然科学基金项目(82001170)