核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6重组腺病毒过表达载体的构建与鉴定

摘要

目的 构建及鉴定携带小鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6（NLRP6）基因（NM＿133 946.2）的过表达重组腺病毒载体。方法 合成小鼠NLRP6基因的编码序列，经酶切后插入腺病毒载体（GL2003）,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α进行培养，挑取转化子，进行聚合酶链反应（PCR）鉴定后送测序进行比对。采用蛋白质印迹法（Western blot）验证重组质粒中NLRP6蛋白的表达。利用Admax包装系统获得重组腺病毒载体Ad-NLRP6,导入HEK293细胞，经扩增纯化后测定病毒滴度。结果 双酶切及DNA测序证明NLRP6成功构建入表达质粒中，同时检测其携带的FLAG标签蛋白，表明NLRP6表达水平显著升高。包装并生产携带NLRP6的重组腺病毒，进一步将病毒感染HEK293细胞，Ad-NLRP6细胞表达绿色荧光蛋白提示感染成功，收集病毒，经扩增纯化后测定病毒滴度为4×10¹⁰ PFU/mL。结论 成功构建携带小鼠NLRP6基因的过表达重组腺病毒载体，这一结果为进一步研究NLRP6分子学功能提供了有效工具。

关键词

NLRP6基因 / 重组腺病毒载体 / 炎症 / 代谢性疾病