N6-甲基腺苷阅读蛋白人类抗原R对结直肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解的影响及其与磷酸果糖激酶1的关系

摘要

目的 探讨N6-甲基腺苷（m⁶A）阅读蛋白人类抗原R（HuR）对结直肠癌细胞迁移、侵袭及糖酵解能力的影响及其与6-磷酸果糖激酶1 （PFK1）的关系。方法 收集2022年4—12月在郑州大学附属郑州中心医院首次确诊为结直肠癌的33例患者的组织标本，通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织中HuR和PFK1 mRNA表达量，检测正常肠上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞HCT8、SW480、SW620、HCT116、LoVo、RKO和COLO205中HuR mRNA表达量；使用小干扰RNA构建敲减HuR的结直肠癌细胞模型，通过细胞划痕实验、Transwell实验分别检测HuR对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响；通过qRT-PCR、Western bolt实验分别检测PFK1 mRNA及其蛋白表达量；采用葡萄糖含量试剂盒、丙酮酸含量试剂盒分别检测葡萄糖摄取量、丙酮酸生成量；通过生物信息学分析探讨HuR与PFK1的关系，采用放线菌素D实验评估HuR对PFK1 mRNA稳定性的影响。结果 在结直肠癌组织中，HuR、PFK1在mRNA水平上呈高表达；在结直肠癌细胞系中，HuR在mRNA水平上呈高表达；下调HuR可以显著抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭能力，同时可以降低葡萄糖消耗量及丙酮酸生成量；敲低HuR可以抑制PFK1 mRNA的稳定性，降低其在mRNA和蛋白水平的表达量。PFK1上存在m⁶A修饰位点。结论 m⁶A阅读蛋白HuR可能通过识别结合PFK1上的m⁶A位点降低PFK1 mRNA稳定性，从而调控结直肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解能力。

关键词

结直肠癌 / N6-甲基腺苷 / 人类抗原R / 6-磷酸果糖激酶1 / 迁移 / 侵袭 / 糖酵解