基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路探讨柚皮素对视网膜微血管内皮细胞的损伤机制研究

摘要

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探讨柚皮素(NAR)对人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的损伤机制。方法 将HRMECs随机分为对照组、高糖(HG)组、HG+NAR组(3 mg/L NAR)、HG+激活剂(AICAR)组(1 mmol/L AICAR)、HG+NAR+AICAR组(3 mg/L NAR+1 mmol/L AICAR);除对照组向培养基中加入5 mmol/L的D-葡萄糖处理外，其他各组均向培养基中加入30 mmol/L的D-葡萄糖处理。采用CCK-8及Transwell分别检测细胞增殖及迁移情况；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测自噬因子LC3 mRNA、p62 mRNA表达水平；采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测AMPK/mTOR通路及自噬相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比，HG组细胞活力，迁移数，IL-1β、IL-6和TNF-α水平，p-AMPK/AMPK, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达增加，p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降，差异有统计学意义(P<0.05);与HG组相比，HG+NAR组细胞活力，迁移数，IL-1β、IL-6和TNF-α水平，p-AMPK/AMPK, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达下降，p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达增加，但HG+AICAR组细胞活力，迁移数，IL-1β、IL-6和TNF-α水平，p-AMPK/AMPK, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达增加，p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降，差异有统计学意义(P<0.05);与HG+NAR组相比，HG+NAR+AICAR组细胞活力，迁移数，IL-1β、IL-6和TNF-α水平，p-AMPK/AMPK, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达增加，p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达下降，差异有统计学意义(P<0.05);与HG+AICAR组相比，HG+NAR+AICAR组细胞活力，迁移数，IL-1β、IL-6和TNF-α水平，p-AMPK/AMPK, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,LC3 mRNA表达下降，p-mTOR/mTOR、p62蛋白及p62 mRNA表达增加，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NAR可减轻HG诱导的HRMECs损伤，其机制可能与抑制AMPK/mTOR通路介导的自噬有关。

关键词

柚皮素 / 视网膜微血管内皮细胞 / 腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路 / 自噬