DNA甲基转移酶1抑制剂联合外胚层信号调节激酶1、同源结构域相互作用蛋白激酶2及糖原合成酶激酶3β治疗复发难治性急性髓系白血病的细胞实验研究

摘要

目的 探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）抑制剂联合外胚层信号调节激酶1（ERK1）、同源结构域相互作用蛋白激酶2（HIPK2）及糖原合成酶激酶3β（GSK3β）抑制剂协同诱导复发难治性急性髓系白血病（AML）细胞凋亡和蛋白阻滞的机制。方法 基于表达综合数据库（GEO）、癌症基因组图谱（TCGA）数据库以及Expression2Kinases等数据库筛选出ERK1、HIPK2和GSK3β等3个治疗靶点。DNMT1抑制剂单独或联合ERK1、HIPK2或GSK3β抑制剂处理人AML细胞系U937细胞；采用CCK-8法检测细胞活力；采用流式细胞术分析细胞凋亡率，采用碘化丙啶单染色法染色法（PI）测定细胞周期分布；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测DNMT1、ERK1、HIPK2和GSK3β的mRNA表达水平；采用免疫印迹法检测DNMT1、ERK1、HIPK2和GSK3β的蛋白表达水平。结果 DNMT1抑制剂能显著抑制U937细胞的细胞活力（P<0.05）,显著诱导U937细胞凋亡和周期阻滞（P<0.05）; DNMT1抑制剂与ERK1、HIPK2或GSK3β抑制剂联合使用时，细胞活力和细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。DNMT1抑制剂及其与ERK1、HIPK2、GSK3β抑制剂联合诱导U937细胞停留在G₀/G₁期，其中两药联合组G₀/G₁期比例显著增高（P<0.05）。DNMT1抑制剂与ERK1、HIPK2、GSK3β抑制剂联合能显著降低U937细胞DNMT1、ERK1、HIPK2和GSK3β的mRNA表达水平（P<0.05）; DNMT1抑制剂与ERK1、HIPK2、GSK3β抑制剂联合能显著降低U937细胞DNMT1、ERK1、HIPK2和GSK3β的蛋白表达水平（P<0.05）。结论 DNMT1抑制剂联合ERK1、HIPK2和GSK3β抑制剂可协同诱导复发难治性AML细胞凋亡和蛋白阻滞，为联合靶向治疗AML提供一种新的策略。

关键词

抑制剂 / DNA甲基转移酶1 / 急性髓系白血病 / 外胚层信号调节激酶1 / 同源结构域相互作用蛋白激酶2 / 糖原合成酶激酶3β / 靶向治疗 / 细胞凋亡 / 蛋白阻滞