旋覆代赭汤对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭活性的影响及机制研究

摘要

目的 探讨旋覆代赭汤对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭活性的影响及机制。方法 使用不同质量浓度的旋覆代赭汤处理人食管癌细胞系EC109,并依据旋覆代赭汤的质量浓度将细胞分为高浓度组(200μg/mL)、中浓度组(100μg/mL)、低浓度组(50μg/mL)和空白组(0μg/mL)。分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭活性。采用蛋白质印迹法(Western blot)和细胞免疫荧光染色法检测各组细胞中糖酵解相关酶[己糖激酶2(HK2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸果糖激酶1(PFK1)]的蛋白表达水平，并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测上述酶编码基因mRNA相对表达量。构建裸鼠负瘤模型，分为对照组和旋覆代赭汤饲喂组(20 mg/kg),观察旋覆代赭汤对食管癌体内生长的影响。结果 CCK-8实验、划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示，旋覆代赭汤可浓度依赖性抑制EC109细胞的增殖、迁移和侵袭活性。Western blot和细胞免疫荧光分析结果显示，与空白组相比，低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞的HK2、LDHA、PFK1蛋白表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05); qRT-PCR检测结果显示，与空白组相比，低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞的HK2 mRNA、LDHA mRNA、PFK1 mRNA相对表达量均降低，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.000 1)。覆代赭汤饲喂组裸鼠背部皮下的肿瘤体积小于对照组，肿瘤组织中LDHA蛋白表达水平低于对照组，促凋亡蛋白Bax表达水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 旋覆代赭汤可浓度依赖性抑制食管癌细胞糖酵解过程，进而抑制细胞增殖、迁移、侵袭及体内肿瘤生长。

关键词

旋覆代赭汤 / 食管癌 / 糖酵解 / 增殖 / 迁移 / 侵袭