miR-211-5p通过TGF-β/Smad2信号通路调控人增生性瘢痕成纤维细胞行为的研究

摘要

目的 探讨微小RNA-211-5p(miR-211-5p)通过转化生长因子(TGF)-β1/Smad同源物2(Smad2)信号通路调控人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)增殖、凋亡、迁移、侵袭和胶原合成的机制。方法 将HSFBs随机分为对照组、miR-NC组、miR-211-5p mimic组、anti-miR-211-5p组及miR-211-5p mimic+SB431542(TGF-β1/Smad2信号通路抑制剂)组；连续培养72 h后，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-211-5p,采用Western blot检测TGF-β1和Smad2蛋白表达量，采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖率，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移力，采用Western blot检测I型胶原(Col-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)蛋白表达量。利用恒温恒压电热烫伤仪烧伤大鼠以建立增生性瘢痕动物模型；建模成功后，各组大鼠经尾静脉注射miR-NC、miR-211-5p mimic。测量大鼠瘢痕愈合情况，苏木精-伊红(HE)染色法观察瘢痕组织病理变化。结果 与对照组和miR-NC组相比，miR-211-5p mimic组miR-211-5p表达量及TGF-β1、Smad2蛋白表达量升高，细胞增殖率增高，侵袭和迁移能力减弱，凋亡率下降，Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白表达量升高，差异有统计学意义(P<0.05); anti-miR-211-5p组呈现相反的表现；anti-miR-211-5p组与miR-211-5p mimic组上述指标差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组相比，miR-211-5p mimic组疤痕愈合率、成纤维细胞数量升高，差异有统计学意义(P<0.05);与miR-211-5p mimic组比较，miR-211-5p mimic+SB431542组TGF-β1、Smad2蛋白表达水平、细胞侵袭和迁移能力减弱，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-211-5p可能通过活化TGF-β1/Smad2信号通路调控HSFBs增殖、凋亡、迁移、侵袭和胶原合成。

关键词

瘢痕成纤维细胞 / 微小RNA-211-5p / 转化生长因子-β1 / Smad同源物2 / 信号通路 / 胶原蛋白