长链非编码RNA肌联蛋白反义RNA1调控微小RNA-134-5p/表皮生长因子受体轴对乳腺癌细胞糖酵解的分子机制

摘要

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌联蛋白反义RNA1(TTN-AS1)调控微小RNA(miR)-134-5p/表皮生长因子受体(EGFR)轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡以及糖酵解的分子机制。方法 采用蛋白质印迹(Western blot)检测EGFR蛋白表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺上皮细胞MCF-10A以及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3中lncRNA TTN-AS1、miR-134-5p和EGFR mRNA表达量。选择MDA-MB-231细胞进行后续实验，并设为对照组、si-lncRNA TTN-AS1组、si-lncRNA TTN-AS1+miR-134-5p-inhibitor组、si-lncRNA TTN-AS1+EGFR-mimic组。采用CCK-8检测各组细胞增殖率。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用乳酸、葡萄糖和三磷酸腺苷(ATP)试剂盒分别检测各组葡萄糖摄取量、乳酸和ATP生成量。采用双荧光素酶报告检测lncRNA TTN-AS1与miR-134-5p、miR-134-5p与EGFR的结合位点。结果 与MCF-10A相比，乳腺癌细胞系中lncRNA TTN-AS1和EGFR mRNA表达量升高，miR-134-5p表达量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。其中，MDA-MB-231细胞中lncRNA TTN-AS1和EGFR mRNA表达量最高，miR-134-5p表达量最低(P<0.05)。与对照组比较，si-lncRNA TTN-AS1组的miR-134-5p表达量升高，lncRNA TTN-AS1、EGFR mRNA及EGFR蛋白表达量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与si-lncRNA TTN-AS1组比较，si-lncRNA TTN-AS1+miR-134-5p-inhibitor组、si-lncRNA TTN-AS1+EGFR-mimic组的EGFR mRNA、EGFR蛋白表达量升高，miR-134-5p表达量下降，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较，si-lncRNA TTN-AS1组细胞增殖率降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与si-lncRNA TTN-AS1组比较，si-lncRNA TTN-AS1+miR-134-5p-inhibitor组、si-lncRNA TTN-AS1+EGFR-mimic组的细胞增殖率升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较，si-lncRNA TTN-AS1组细胞凋亡率升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与si-lncRNA TTN-AS1组比较，si-lncRNA TTN-AS1+miR-134-5p-inhibitor组、si-lncRNA TTN-AS1+EGFR-mimic组的细胞凋亡率降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较，si-lncRNA TTN-AS1组细胞葡萄糖摄取量、乳酸和ATP生成量下降，差异有统计学意义(P<0.05)。与si-lncRNA TTN-AS1组比较，si-lncRNA TTN-AS1+miR-134-5p-inhibitor组、si-lncRNA TTN-AS1+EGFR-mimic组的细胞葡萄糖摄取量、乳酸和ATP生成量升高，差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告证实，lncRNA TTN-AS1与miR-134-5p有靶向结合位点，miR-134-5p与EGFR有靶向结合位点。结论 lncRNA TTN-AS1可能通过负向调控miR-134-5p/EGFR轴，进而影响乳腺癌的增殖、凋亡与糖酵解。

关键词

乳腺癌 / 长链非编码RNA / 肌联蛋白反义RNA1 / 微小RNA-134-5p / 表皮生长因子受体 / 糖酵解 / 细胞增殖 / 细胞凋亡