前蛋白转化酶枯草溶菌素9在巨噬细胞脂质沉积微环境中的表达及其靶向干预研究

摘要

目的 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)具有因果关系。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)可增加低密度脂蛋白受体(LDL-R)降解，促进脂质沉积。本研究观察微小RNA(miRNA)-125a-5p经组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子6(SIRT6)调控组蛋白乙酰化对PCSK9转录表达以及脂质沉积的影响机制。方法 选用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)暴露的RAW264.7巨噬细胞，制备巨噬细胞脂质沉积模型，并分为对照组(A组)、ox-LDL组(B组)、SIRT6激动剂组(C组)、si-SIRT6组(D组)、miR-125a-5p模拟物组(E组)、miR-125a-5p模拟物阴性对照组(F组)、miR-125a-5p抑制物组(G组)和miR-125a-5p抑制物阴性对照组(H组)。采用油红O染色验证巨噬细胞内脂质沉积；采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-125a-5p、SIRT6、PCSK9的基因表达水平；采用蛋白质免疫印迹(WB)检测细胞SIRT6、组蛋白3第9个赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)、组蛋白3(H3)、PCSK9蛋白表达；采用LDL-C试剂盒检测细胞LDL-C含量。结果 与A组相比，B组miR-125a-5p相对表达量增加，SIRT6基因及蛋白相对表达量减少，H3K9ac/H3比值增加，PCSK9基因及蛋白相对表达量增加，LDL-C水平增加，差异有统计学意义(P<0.01); B组H3K9ac与PCSK9蛋白相对表达量呈正相关(r=0.935 0,P<0.01), PCSK9与LDL-C呈正相关(r=0.981 3,P<0.01)。与B组相比，C组miR-125a-5p相对表达量无显著改变(P>0.05),SIRT6基因及蛋白相对表达量增加，H3K9ac/H3比值减少，PCSK9基因及蛋白相对表达量减少，LDL-C水平降低，差异有统计学意义(P<0.01)。与B组相比，D组miR-125a-5p相对表达量无显著改变(P>0.05),SIRT6基因及蛋白相对表达量减少，H3K9ac/H3比值增加，PCSK9基因及蛋白相对表达量增加，LDL-C水平增加，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与B组相比，E组miR-125a-5p相对表达量增加，SIRT6基因和蛋白相对表达量减少，H3K9ac/H3比值增加，PCSK9基因及蛋白相对表达量增加，LDL-C水平增加，差异有统计学意义(P<0.01)。与B组相比，G组miR-125a-5p相对表达量含量减少，SIRT6基因及蛋白相对表达量增加，H3K9ac/H3比值减少，PCSK9基因及蛋白相对表达量减少，LDL-C水平降低，差异有统计学意义(P<0.01)。与B组相比，F组、H组miR-125a-5p、SIRT6、H3K9ac/H3比值、PCSK9、LDL-C含量无显著改变(P>0.05)。结论 表观遗传学是动脉粥样硬化(AS)发生和发展的重要调节方式，LDL-C增高是AS重要的危险因素，PCSK9表达增加恶化脂质沉积。组蛋白乙酰化失衡是参与PCSK9介导脂质沉积的新机制，有可能成为脂质代谢紊乱的早期检测标志物。SIRT6是一种保护性因素，可逆调节PCSK9转录表达，减轻脂质沉积，延缓AS进展。miR-125a-5p可靶向抑制SIRT6基因的转录作用，实现对组蛋白乙酰化调控，或可成为血脂异常的另一种早期筛查和防治新靶点。

关键词

前蛋白转化酶枯草溶菌素9 / 巨噬细胞 / 基因表观遗传学 / 组蛋白乙酰化失衡 / 脂质代谢紊乱 / 微小核糖核酸 / 氧化型低密度脂蛋白 / 沉默信息调节因子6

基金资助

国家心血管疾病临床医学研究中心自主课题(NCRC2022003); 沈阳市科技局课题(22-321-33-93)