微小RNA-146a-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及机制研究

摘要

目的 探讨微小RNA-146a-5p(miR-146a-5p)通过调控高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,按不同处理方法将细胞分为正常对照组(Con组)、高糖组(HG组)、HG+miR-146a-5p组、HG+si-HMGA2组、HG+miR-146a-5p+pcDNA-HMGA2组、miR-NC组、miR-146a-5p组、anti-miR-NC组和anti-miR-146a-5p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-146a-5p、HMGA2 mRNA表达水平；采用双荧光素酶报告实验验证miR-146a-5p与HMGA2的靶向关系；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cleaved-caspase9)、HMGA2蛋白表达水平；采用流式细胞术测定各组细胞凋亡率；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)]水平；检测各组细胞中氧化应激指标[过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)]水平。结果 HMGA2的3′-非翻译区(3′-UTR)序列中存在与miR-146a-5p互补的核苷酸序列；miR-146a-5p组HMGA2蛋白表达水平低于miR-NC组，anti-miR-146a-5p组HMGA2蛋白表达水平高于anti-miR-NC组，差异有统计学意义(P<0.05)。HG组总细胞凋亡率、早期细胞凋亡率、晚期细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白、cleaved-caspase9蛋白、HMGA2 mRNA、HMGA2蛋白、TNF-α、IL-6、IL-8、MDA水平高于Con组，miR-146a-5p、CAT、SOD水平低于Con组，差异有统计学意义(P<0.05); HG+miR-146a-5p组总细胞凋亡率、早期细胞凋亡率、晚期细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白、cleaved-caspase9蛋白、HMGA2 mRNA、HMGA2蛋白、TNF-α、IL-6、IL-8、MDA水平低于HG组，miR-146a-5p、CAT、SOD水平高于HG组，差异有统计学意义(P<0.05); HG+si-HMGA2组总细胞凋亡率、早期细胞凋亡率、晚期细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白、cleaved-caspase9蛋白、HMGA2 mRNA、HMGA2蛋白、TNF-α、IL-6、IL-8、MDA水平低于HG组，CAT、SOD水平高于HG组，差异有统计学意义(P<0.05); HG+miR-146a-5p+pcDNA-HMGA2组总细胞凋亡率、早期细胞凋亡率、晚期细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白、cleaved-caspase9蛋白、HMGA2 mRNA、HMGA2蛋白、TNF-α、IL-6、IL-8、MDA水平高于HG+miR-146a-5p组，CAT、SOD水平低于HG+miR-146a-5p组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-146a-5p可能通过靶向HMGA2,发挥对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的调控作用。

关键词

微小RNA-146a-5p / 高迁移率族蛋白A2 / 肾小管上皮细胞 / 高糖 / 细胞凋亡 / 氧化应激 / 炎症反应 / 糖尿病肾病

基金资助

陕西省自然科学基金项目(2020FR26003)