铜绿假单胞菌缺失绿脓菌素合成基因PAOII的菌株构建及其耐药性研究

摘要

目的 构建铜绿假单胞菌(PA)缺失绿脓菌素合成基因PAOII的菌株，并探究其耐药性。方法 通过分析PA中PAOII基因型菌株的基因组，挖掘与绿脓菌素合成相关基因/基因簇在基因组中的分布。通过同源重组无缝敲除技术构建绿脓菌素合成基因phzM缺失的菌株，对比野生型与突变型菌株生长情况及其对药物的耐受性。结果 在https://www.kegg.jp/网站进行京都基因和基因组百科全书(KEGG)聚类分析，结果发现1个由9个基因(包括PhzA、PhzB、PhzC、PhzD、PhzE、PhzF、PhzG、phzM、PhzS)组成的基因簇，与KEGG PATHWAY:Phenazine biosynthesis-M00835 Pyocyanine biosynthesis通路完全吻合。通过同源重组敲除绿脓菌素合成关键基因phzM,交换后使用引物phzM-AF和phzM-BR验证在M9-柠檬酸培养基上生长的单克隆菌株，穿梭质粒pK18mobSacB-phzM-AB成功转染至PAOII基因型菌株中。基因交换后，挑选能在无抗平板上生长的单克隆菌株，行聚合酶链式反应(PCR)以获得phzM基因无痕敲除成功的菌株。培养3、6 d时，PAOII基因型菌株生物被膜形成厚度大于PAOII-ΔphzM菌株，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 绿脓菌素合成缺陷菌株生物被膜合成能力降低，且对头孢类抗生素(头孢他啶)耐药性降低。

关键词

铜绿假单胞菌 / 绿脓菌素 / 生物被膜 / 耐药性 / PAOII基因型菌株 / 头孢类抗生素 / 转染 / 菌株