不同时间点使用盐酸戊乙奎醚对脑出血模型大鼠神经功能及血脑屏障的影响

摘要

目的 探讨不同时间点使用盐酸戊乙奎醚(PHC)对重症脑出血(ICH)模型大鼠神经功能及血脑屏障(BBB)的影响，并基于生长停止特异性蛋白6(GAS6)/受体酪氨酸激酶(Axl)信号通路初步探讨其潜在的作用机制。方法 采用颅脑内注射Ⅳ型胶原酶溶解液法构建ICH模型大鼠。将模型大鼠随机分为假手术组(颅脑内注射等体积生理盐水)、模型组(脑颅内注射0.4μL的Ⅳ型胶原酶溶解液)、24 h给药组(脑颅内注射0.4μL的Ⅳ型胶原酶溶解液联合造模成功24 h后腹腔注射2 mg/kg的PHC)、6 h给药组(脑颅内注射0.4μL的Ⅳ型胶原酶溶解液联合造模成功6 h后腹腔注射2 mg/kg的PHC)、预给药组(造模前腹腔注射2 mg/kg的PHC联合脑颅内注射0.4μL的Ⅳ型胶原酶溶解液)和通路抑制剂组(造模前腹腔注射2 mg/kg的PHC联合造模成功后脑颅内注射0.4μL的Ⅳ型胶原酶溶解液和腹腔注射75 mg/kg的GAS6/Axl信号通路抑制剂R428)。评估造模成功后和治疗结束时大鼠神经功能损伤程度；计算大鼠脑组织含水量；采用苏木素-伊红(HE)、伊文思蓝(EB)法评估大鼠脑组织损伤和EB含量；采用Western Blot检测脑组织中紧密连接蛋白5(Claudin-5)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和GAS6/Axl信号通路相关蛋白表达水平。结果 HE染色结果显示：与假手术组相比，模型组大鼠脑组织细胞排列不规则，可见大量坏死细胞，伴有大量炎性细胞浸润；与模型组相比，24 h给药组、6 h给药组、预给药组和通路抑制剂组大鼠脑组织细胞较为整齐，细胞间隙和炎性细胞浸润现象减轻；与24 h给药组相比，6 h给药组、预给药组和通路抑制剂组大鼠脑组织细胞结构较为完整，细胞间隙和炎性细胞浸润程度减轻；与预给药组相比，6 h给药组和通路抑制剂组大鼠脑组织细胞有轻微肿胀和少量炎性细胞浸润。与假手术组相比，模型组大鼠神经功能评分、脑组织含水量以及脑组织中EB含量、MMP9蛋白水平增加，ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白水平以及GAS6、p-Axl蛋白表达降低；与模型组相比，24 h给药组、6 h给药组、预给药组和通路抑制剂组大鼠神经功能评分、脑组织含水量以及脑组织EB含量、MMP9蛋白水平降低，ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白水平以及脑组织中GAS6、p-Axl蛋白水平增加；与24 h给药组相比，6 h给药组、预给药组和通路抑制剂组大鼠神经功能评分、脑组织含水量以及脑组织EB含量、MMP9蛋白水平降低，ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白水平以及GAS6、p-Axl蛋白表达增加；与预给药组相比，6 h给药组和通路抑制剂组大鼠神经功能评分、脑组织含水量以及脑组织EB含量、MMP9蛋白水平增加，ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白水平以及脑组织中GAS6、p-Axl蛋白表达降低；上述组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 早期使用PHC能够通过减轻脑组织损伤和脑水肿，改善ICH大鼠神经功能和BBB,其机制可能与激活GAS6/Axl信号通路有关。

关键词

盐酸戊乙奎醚 / 生长停止特异性蛋白6 / 受体酪氨酸激酶 / 信号通路 / 脑出血 / 血脑屏障 / 神经功能 / 基质金属蛋白酶 / 紧密连接蛋白

基金资助

绵阳市卫健委2019年科研课题鼓励项目(201957)