Y-box结合蛋白1对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制研究

摘要

目的 探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法 基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析胆管癌中YBX1表达及其与患者预后的关系，并结合免疫组织化学染色法在胆管癌患者癌组织与癌旁组织中进行验证。采用蛋白质印迹法检测人正常胆管HIBEC细胞和胆管癌细胞系(KMBC、CC-LP-1、QBC939细胞)中YBX1蛋白表达水平；构建过表达YBX1和敲减YBX1的KMBC细胞系，通过CCK-8实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验观察YBX1对KMBC细胞增殖、迁移和侵袭的影响；采用蛋白质印迹法检测YBX1对KMBC细胞中Wnt/β-catenin通路活性及其信号分子[细胞周期蛋白A1(cyclinA1)、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9]表达的影响。结果 TCGA数据库分析显示，YBX1在不同病理分期、不同淋巴结转移情况胆管癌组织中的表达均高于正常胆管组织，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.001); YBX1高表达与胆管癌患者的总生存期和无复发生存期呈显著负相关(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示，胆管癌患者癌组织中YBX1阳性表达量高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.001)。胆管癌细胞系(KMBC、CC-LP-1、QBC939细胞)中YBX1蛋白表达水平均高于人正常胆管HIBEC细胞，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.001)。成功构建YBX1稳定过表达和YBX1敲减的KMBC细胞系后，细胞实验结果显示，过表达YBX1可促进KMBC细胞增殖、迁移和侵袭，上调β-catenin、cyclinA1、CDK1、MMP-2和MMP-9表达水平，敲减YBX1则可显著抑制KMBC细胞增殖、迁移和侵袭，下调β-catenin、cyclinA1、CDK1、MMP-2和MMP-9表达水平，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论 YBX1通过激活Wnt/β-catenin信号通路，上调cyclinA1、CDK1、MMP-2和MMP-9蛋白表达，促进胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词

Y-box结合蛋白1 / Wnt/β-catenin信号通路 / 胆管癌 / 细胞增殖 / 细胞侵袭 / 细胞迁移 / 预后 / 细胞实验