lncRNA MEG3基因表观遗传学对巨噬细胞脂质代谢的干预机制研究

摘要

目的 基于巨噬细胞模型观察长链非编码RNA母系表达基因3（lncRNA MEG3）与微小RNA（miR）-642a-5p对甘油三酯（TG）生成限速酶脂蛋白脂酶（LPL）的影响，并从基因表观遗传学水平探讨降低TG抗动脉粥样硬化（AS）的细化作用机制。方法 采用50 mg/L氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDL）制备人单核白血病细胞（THP-1）模型，给予不同转染干预。采用实时定量聚合酶链反应（qRCR）法检测lncRNA MEG3、miR-642a-5p、血管生成素样蛋白4（ANGPTL₄）、LPL的基因表达；采用蛋白免疫印迹（WB）法检测ANGPTL₄、LPL的蛋白表达；采用油红染色观察带有红色脂滴颗粒细胞数目（代表细胞脂质沉积）。结果 （1）在ox-LDL暴露的THP-1细胞模型中，lncRNA MEG3高表达，miR-642a-5p低表达，ANGPTL₄高表达，LPL低表达，带有红色脂滴颗粒细胞数目高表达，差异均有统计学意义（P<0.01）。（2） lncRNA MEG3与miR-642a-5p基因相对表达水平呈负相关（r=-0.764 9,P=0.045）, miR-642a-5p与ANGPTL₄基因相对表达水平呈负相关（r=-0.976 5,P=0.001 2）, ANGPTL₄与LPL蛋白相对表达水平呈负相关（r=-0.929 3,P=0.002 5）,ANGPTL₄与带有红色脂滴颗粒细胞数目呈正相关（r=0.897 1,P=0.025）。（3）上调miR-642a-5p, ANGPTL₄蛋白及基因相对表达水平降低，LPL蛋白及基因相对表达水平增加，差异有统计学意义（P<0.01）;下调miR-642a-5p, ANGPTL₄蛋白及基因相对表达水平增加，LPL蛋白及基因相对表达水平降低，差异有统计学意义（P<0.01）。（4）敲除lncRNA MEG3, ANGPTL₄蛋白及基因相对表达水平降低，miR-642a-5p基因、LPL蛋白及基因相对表达水平增加，差异有统计学意义（P<0.01）。（5）敲除lncRNAMEG3且上调miR-642a-5p, miR-642a-5p基因、LPL基因及其蛋白相对表达水平增加，ANGPTL₄基因及其蛋白相对表达水平降低，差异有统计学意义（P<0.01）;敲除lncRNA MEG3且下调miR-642a-5p, miR-642a-5p基因、LPL基因及其蛋白相对表达水平降低，ANGPTL₄基因及其蛋白相对表达水平增加，差异有统计学意义（P<0.01）。结论 ANGPTL₄抑制LPL成为促进脂质沉积新的炎症因子，miR-642a-5p通过靶向抑制ANGPTL₄基因表达，减少巨噬细胞脂质沉积，而lncRNA MEG3可能作为竞争性内源RNA,通过“海绵吸附效应”抑制miR-642a-5p使下游ANGPTL₄基因转录表达增加，抑制LPL促进TG生成。

关键词

心血管残余风险 / 甘油三酯 / 表观遗传学 / 长链非编码RNA / 脂蛋白脂酶 / 血管生成素样蛋白4 / 微小RNA-642a-5p / 巨噬细胞 / 母系表达基因3