肝细胞癌患者外周血单核细胞中TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3表达与肿瘤微环境免疫特征以及术后复发的相关性

摘要

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者外周血单核细胞（PBMCs）中肿瘤坏死因子受体超家族4（TNFRSF4）、神经转录因子1（NEUROD1）、POU结构域2类转录因子3（POU2F3）表达与肿瘤微环境（TME）的关系。方法 采用回顾性病例对照研究设计，选取2022年1月—2025年1月在本院普通外科接受根治性手术的90例HCC患者为研究对象，根据术后随访结果的不同分为复发组32例和未复发组58例。另选取本院健康体检中心50例健康人群作为对照组。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组术前外周血PBMCs中TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3的mRNA表达水平。采用多重免疫组织化学（mIHC）技术检测肿瘤组织中免疫细胞亚群的浸润情况；采用Spearman相关性分析探讨TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3表达与CD8⁺T细胞、FoxP3⁺ Tregs、CD68⁺M2型巨噬细胞等免疫细胞浸润的关系。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，分析TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3的mRNA表达对HCC患者复发转移的预测价值。结果 复发组与未复发组患者中国肝癌的分期方案（CNLC）分期、微血管侵犯（MVI）分级比较，差异有统计学意义（P<0.05）。复发组和未复发组TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3的mRNA表达水平均高于对照组，复发组TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3的mRNA表达水平均高于未复发组，差异均有统计学意义（P<0.05）。未复发组CD8⁺T细胞密度显著高于复发组（t=11.751,P<0.001）,而FoxP3⁺ Treg在复发组中比例更高（t=16.797,P<0.001）, CD68⁺巨噬细胞密度在复发组亦增加（t=7.104,P<0.001）,复发组CD8/FoxP3比值显著低于未复发组（t=15.632,P<0.001）。Spearman相关性分析显示，TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3表达与CD8⁺T细胞浸润呈负相关，与FoxP3⁺Tregs及CD68⁺M2巨噬细胞呈正相关。为排除CNLC分期和MVI分级对结果的影响，进一步进行偏相关分析，结果显示在调整混杂因素后，各基因表达与免疫细胞浸润的相关性依然显著。ROC曲线结果显示，TNFRSF4、NEUROD1、POU2F3联合模型的预测效能显著提升（AUC=0.900）,灵敏度为88.51%,特异度为77.87%,优于单一指标（TNFRSF4对比联合预测：Z=3.751,P<0.001;NEUROD1对比联合预测：Z=4.980,P<0.001;POU2F3对比联合预测：Z=4.984,P<0.001）预测价值。结论 HCC患者PBMCs中TNFRSF4、NEUROD1和POU2F3的mRNA水平呈高表达，且与TME特征（CD8⁺T细胞减少、FoxP3⁺Treg增加）显著相关。TNFRSF4、NEUROD1和POU2F3联合模型在初步分析中展现出对术后复发较高的预测潜力，为开发无创监测生物标志物提供了新方向。

关键词

肝细胞癌 / 肿瘤微环境 / 肿瘤坏死因子受体超家族4 / 神经转录因子1 / POU结构域2类转录因子 / 复发 / 转移 / 外周血单核细胞